[发明专利]T细胞单型的分析

说明书

一种研究T细胞种群的单型的方法，包括检测T细胞种群中的T细胞受体β链恒定区TRBC1和TRBC2、和/或T细胞受体γ链恒定区TRGC1和TRGC的表达。

技术领域

本发明涉及用于研究T细胞单型的方法，并且特别涉及能够将炎性(也被称为反应性或良性)T细胞浸润与肿瘤(也称为恶性或淋巴瘤)T细胞浸润区分的引物、探针和其他包含寡核苷酸和抗体的特异性检测试剂。本发明还涉及区分炎性T细胞浸润与肿瘤T细胞浸润的方法。

背景技术

组织浸润淋巴细胞的单型的分析是重要的和常见的临床病理学问题，以便将炎性浸润与肿瘤浸润(例如，淋巴瘤或白血病)区分。在B细胞淋巴瘤的环境下，这通常通过使用对κ和λ轻链特异的检测试剂在研究的早期阶段进行。偏离的κ:λ比率提高了组织B细胞浸润是肿瘤性而不是反应性/炎性的可能性。当B细胞种群中的所有B细胞仅表达一条轻链(仅κ或仅λ)时，其被称为单型种群。单型种群的存在支持存在克隆或肿瘤性B细胞种群的可能性，并且因此是临床实践中常用的诊断研究。B细胞的单克隆种群将具有相同的V区；这只能通过确定V区的确切序列或序列的一些替代物，例如使用特异性引物的PCR片段大小来确定。

然而，在T细胞浸润的环境中，单型的指定是不可能的，因为κ和λ链不由T细胞表达。代替地，通过进行T细胞受体基因重排研究支持T细胞赘生物(neoplasm)的诊断，其中通过PCR扩增重排的T细胞受体基因，然后通过凝胶或基因扫描仪分析来表征，以检验显性克隆扩增的T细胞受体可变区(α、β、γ或δ)的存在。与κ/λ染色相比，这是昂贵且耗时的途径，并且仅在专业中心进行。此外，由于反应性浸润也经常与寡克隆抗原特异性T细胞扩增相关，并且肿瘤种群可以具有相关的抗肿瘤或其它炎性T细胞应答，所以使用T细胞受体基因重排研究仍然常常难以将反应性浸润与肿瘤浸润区分。因此，对数据的解释是高度专业化的，并且是有争议的。实际上，在临床背景和相关的组织学特征的环境下解释T细胞受体基因重排研究，但是与其中可以使用κ和λ的B细胞不同，解释收到不能在组织学上可视化促进单/寡或多克隆性的T细胞的阻碍。因此，将炎性T细胞种群与肿瘤性T-细胞种群区分的简单测试在临床病理学实践中，以及作为人类和非人类系统中的研究工具以检验T细胞种群的单型程度(作为T细胞克隆性的替代)将是有价值的。这种系统的应用的实例是在淋巴结、皮肤、肠、骨髓、肺、肾、血液和实际上任何其它组织的组织中的T细胞单型的分析。此外，作为克隆性的替代，T-细胞种群是否为单型的确定在预测T细胞淋巴瘤之外的一系列病症中的预后中可能是重要的，其中T细胞种群的作用是重要的，例如(但不限于)，T细胞种群浸润其他肿瘤，或T细胞种群在各种器官中引起病症，如在自身免疫疾病中或在骨髓或实体器官移植后。

发明内容

本发明的一个目的是提供使得能够分析T细胞单型和提供克隆性的支持证据的方法和试剂。然后该信息可以用于将炎性细胞与肿瘤性细胞区分和/或评估种群在其他情况下(其可以是结果预测、药物反应等)是克隆性的可能性。

所有的T细胞，包括自然杀伤T细胞(NKT细胞)，在其表面上表达多个T细胞受体(TCR)的拷贝。TCR由两条链(α链和β链或γ链和δ链)组成，每条链具有恒定区和可变区。由于在T细胞发育期间的体细胞(遗传)重组，可变区可以以数百万个不同序列存在。作为单克隆，T细胞种群必须具有其中所有V区都相同的T细胞。每条链也具有恒定区。所有α恒定区是相同的，然而β恒定区可以以两种形式，作为TRBC1(也称为TCRBC1)和TRBC2(也称为TCRBC2)存在。Droese et al.Leukemia(2004)18,1531-1538中讨论了TRBC1和TRBC2。类似地，γ链包含称为TRGC1(也称为TCRG1)和TRGC2(也称为TCRG2)的两个非常相似的恒定区中的一种。T细胞受体的总体结构决定了其与由MHC或MHC样分子代表的抗原结合的特异性。在单型种群中，种群中的所有(或基本上所有)的T细胞将具有相同的恒定区，例如，均为TCRBC1或TCRBC2。在T细胞的多型种群中，一些T细胞具有带有这些恒定区中的每种中的一种形式的受体，并且一些T细胞具有这些恒定区中的每种中的其他形式的受体，但每个单独的T细胞将仅具有一种类型的恒定区。