[发明专利]用于生产带标签的核苷酸的化学方法

权利要求书

1.带标签的核苷酸，其包含在核苷酸的5’位置处的包括末端磷酸酯的3-6个磷酸酯以及通过共价键共价结合至所述核苷酸的末端磷酸酯的标签，所述共价键包含三唑、1,2-二嗪、二硫化物、仲胺、腙、硫代乙酰胺或马来酰亚胺-硫加成物作为所述共价键的一部分，其中所述标签包含寡核苷酸，其中

(i)所述寡核苷酸包含非天然存在的核苷酸间连接；

(ii)所述寡核苷酸的5’末端通过所述共价键结合至所述末端磷酸酯，并且所述寡核苷酸的3’末端具有保护其免受核酸外切酶降解的甲基膦酸酯、磷酸酯或烷基碳间隔子基团，或者所述寡核苷酸的3’末端通过所述共价键结合至所述末端磷酸酯，并且所述寡核苷酸的5’末端具有保护其免受核酸外切酶降解的甲基膦酸酯、磷酸酯或烷基碳间隔子基团；或

(iii)所述寡核苷酸包含至少一个无碱基间隔子(dSp)。

2.根据权利要求1所述的带标签的核苷酸，其中所述标签通过共价键共价结合至所述末端磷酸酯，所述共价键包含具有如下结构的三唑作为所述共价键的一部分：

其中R₁包含所述标签，R₂包含所述核苷酸；或者

其中R₁包含所述核苷酸，R₂包含所述标签；或者

所述三唑具有如下结构：

其中R₁和R₃联合形成环状部分；并且

其中联合的R₁和R₃包含标签，R₂包含核苷酸；或者

其中联合的R₁和R₃包含核苷酸，R₂包含标签。

3.根据权利要求1或2所述的带标签的核苷酸，其中所述带标签的寡核苷酸包含在核苷酸5’位置处的4-6个磷酸酯。

4.根据权利要求1或2所述的带标签的核苷酸，其中所述标签还包括肽、聚乙二醇(PEG)、寡糖、肽核酸(PNA)、乙烯聚合物或其任意组合。

5.根据权利要求1或2所述的带标签的核苷酸，其中所述标签的所述寡核苷酸包含至少30个单体单元。

6.根据权利要求1或2所述的带标签的核苷酸，其中所述寡核苷酸包含非天然核苷酸。

7.根据权利要求6所述的带标签的核苷酸，其中所述非天然核苷酸包含选自由L-核苷酸，2’,5’-键、α-D-核苷酸、非天然存在的核苷酸间连接、非天然存在的碱基、非天然存在的糖部分以及其任意组合组成的组；或者，其中所述非天然核苷酸包含选自由硝基吡咯、硝基吲哚、水粉伞素(nebularine)、泽布拉林(zebularine)、苯和苯衍生物组成的组的非天然存在的碱基；或者其中所述非天然核苷酸包含选自磷酸三酯、硫代磷酸酯、甲基膦酸酯、硼磷酸酯、磷酰胺酯和吗啉基部分的非天然存在的核苷酸间连接。

8.根据权利要求1或2所述的带标签的核苷酸，其中所述寡核苷酸的5’-端通过所述共价键结合至在所述核苷酸的5’位置处的末端磷酸酯。

9.根据权利要求8所述的带标签的核苷酸，其中所述寡核苷酸包含在其3’末端处的、保护其免受核酸外切酶降解的甲基膦酸酯、磷酸酯或烷基碳间隔子基团。

10.根据权利要求9所述的带标签的核苷酸，其中所述其3’末端的化学修饰选自磷酸酯化和与具有末端羟基的C₃-烷基至C₁₂-烷基间隔子的共价结合。

11.根据权利要求1或2所述的带标签的核苷酸，其中所述寡核苷酸的3’端通过所述共价键结合至在所述核苷酸的5’位置处的末端磷酸酯。