[发明专利]DNA改组后的细菌外膜蛋白ompAs-19及其作为免疫调节剂的应用

说明书

本发明属于DNA改组技术领域，具体公开了DNA改组后的细菌外膜蛋白ompAs‑19及其作为免疫调节剂的应用。发明首次采用DNA改组技术结合免疫学研究，以溶藻弧菌、副溶血弧菌、迟缓爱德华氏菌以及大肠杆菌的外膜蛋白OmpA为研究对象，通过DNA改组技术获得DNA改组后的细菌外膜蛋白ompAs‑19，其氨基酸序列如如SEQ ID NO：2所示。DNA改组后的细菌外膜蛋白ompAs‑19对溶藻弧菌具有较高的免疫保护作用，其相对免疫保护率（RPS）为100%。此外，还显示出对迟缓爱德华氏菌的交叉免疫原性，其免疫保护率（RPS）达到85.71%。这些结果说明19号改组OmpA（ompAs‑19）可作为疫苗组分。

技术领域

本发明涉及DNA改组技术领域，具体涉及DNA改组后的细菌外膜蛋白ompAs-19及其作为免疫调节剂的应用。

背景技术

在水产动物养殖中，往往使用各种化学药物和抗生素来控制有关疾病, 但长期用药, 不仅导致病原菌的抗药性越来越明显, 而且使药物残留的危害也日益显现，严重地影响水产品安全，所以通过疫苗进行免疫预防更受到高度重视。目前我国水产养殖业的主要病原菌是弧菌和迟钝爱德华氏菌，而目前无针对多种细菌的多价高效疫苗，因此，研制以具有免疫保护作用的高效多价疫苗具有广阔的应用前景。

研究已经发现细菌外膜蛋白OmpA具有良好的免疫原性，不仅可以刺激体液免疫，而且对细胞免疫亦有刺激作用。但是外膜蛋白OmpA仅仅对同种细菌具有良好的免疫调节功能，对其他细菌的免疫调节功能较低。如溶藻弧菌OmpA针对溶藻弧菌感染时保护率达到87.5%，而副溶血弧菌OmpA对溶藻弧菌感染时保护率仅为35.6%；副溶血弧菌和迟缓爱德华氏菌的OmpA在针对自身细菌感染时保护率仅为40%左右。我国养殖鱼类个体偏小，从经济效率和实际操作来考虑，也难以对常见病原菌逐一进行疫苗免疫。

DNA改组技术可以在分子水平上对基因进行体外有性重组，由此改变单个基因或基因家族原有的核苷酸序列，创造新基因并赋予表达产物新功能，推动了生物工程的诸多领域突飞猛进地向前发展。但目前尚无用该技术获得多效多价疫苗的研制的报道。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术的上述不足，提供一种DNA改组后的细菌外膜蛋白ompAs-19。

本发明的另一个目的是提供DNA改组后的细菌外膜蛋白ompAs-19作为免疫调节剂的应用。

为了实现上述目的，本发明是通过以下技术方案予以实现的：

DNA改组后的细菌外膜蛋白ompAs-19，编码该蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

DNA改组后的细菌外膜蛋白ompAs-19，其氨基酸序列如如SEQ ID NO：2所示。

SEQ ID NO：2所述的DNA改组后的细菌外膜蛋白ompAs-19在制备动物免疫调节剂中的应用。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

本发明首次采用DNA改组技术结合免疫学研究，以溶藻弧菌、副溶血弧菌、迟缓爱德华氏菌以及大肠杆菌的外膜蛋白OmpA为研究对象，通过DNA改组技术获得改组OmpA基因，进一步构建了原核表达的改组OmpA质粒库；通过SDS-PAGE鉴定获得43个能正确表达的改组OmpA基因；将所有这些改组OmpA基因构建真核表达的改组OmpA质粒库，即DNA疫苗；最后用斑马鱼作为模式动物深入研究其免疫保护性。免疫和攻毒实验结果表明19号改组OmpA基因（ompAs-19）对溶藻弧菌具有较高的免疫保护作用，其相对免疫保护率（RPS）为100%。此外，还显示出对迟缓爱德华氏菌的交叉免疫原性，其免疫保护率（RPS）达到85.71%。这些结果说明19号改组OmpA（ompAs-19）可作为疫苗组分。

附图说明