[发明专利]一种简便的SDS裂解制备细菌基因组DNA悬液的方法及应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别涉及一种简便的SDS裂解制备细菌基因组DNA悬液的方法及应用。

背景技术

细菌分子鉴定技术中，16SrDNA序列的PCR扩增鉴定已经是十分常用的手段。在实验室的实际操作中，用于PCR扩增的模板DNA来源各异，比如试剂盒提取纯化的DNA，或者是直接蘸取固体培养基上的单菌落菌体。但是前者的缺点是试剂繁多、步骤复杂，后者的缺点是平行组之间挑取的菌量不稳定、未知细菌能否自裂解释放DNA。

因此，寻找一种比较简单快速、环境友好、同时能确保细菌裂解释放出基因组DNA模板的制备方法，有利于提高细菌16SrDNA序列PCR的效率。

发明内容

为克服上述现有技术中存在的缺点与不足，本发明的首要目的在于提供一种简便的SDS裂解制备细菌基因组DNA悬液的方法。

本发明的另一目的在于提供上述制备细菌基因组DNA悬液的方法PCR扩增鉴定(特别是16SrDNA序列的PCR扩增鉴定)中的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：一种简便的SDS裂解制备细菌基因组DNA悬液的方法，其包括以下步骤：

(1)细菌培养：用试管装入已灭菌的液体培养基1000mL，接种细菌，经过夜培养12～16小时；

(2)菌体收集：吸取1000μL细菌悬液12000rpm离心1分钟沉淀菌体，并去除上清液；

(3)菌体的裂解：往菌体沉淀加入10μL0.1-10％的SDS(十二烷基硫酸钠)溶液，混匀后用涡旋振荡器震荡5分钟；

(4)稀释裂解液：加入490μL的无菌水或者1×TE溶液，吹打混匀，稍作离心，即可得到浓度适当，可直接用于PCR等基因操作的细菌基因组DNA模板悬液。

步骤(1)中所述的细菌为兼性厌氧菌或好氧细菌。

步骤(1)中所述的细菌为兼性厌氧菌时，采用静置培养；所述的细菌为好氧细菌时，摇床培养。

上述方法制备获得的细菌基因组DNA悬液可直接用于PCR的细菌DNA模板。每25μLPCR体系直接加入1～1.5μL细菌基因组DNA悬液作为反应模板。

本发明与现有技术相比具有如下优点：

本发明提供一种简便的SDS裂解制备细菌基因组DNA悬液的方法，获得细菌基因组DNA模板悬液，可直接用于PCR的细菌DNA模板；具体为每25μLPCR体系加入1～1.5μL细菌基因组DNA悬液作为反应模板即可；本发明所述的方法和应用极大的简化了PCR扩增鉴定(特别是16SrDNA序列的PCR扩增鉴定)，具有广阔的市场应用前景。

附图说明

图1为PCR产物的1％琼脂糖凝胶电泳图，其中，泳道1：DNAmarker2000，其中750bp条带已知为20ng/μL；泳道2：静止培养12小时后的乳酸菌；泳道3：摇床培养12小时后的醋酸菌。

具体实施方式

下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

实施例1

(1)乳酸菌培养：用试管装入已灭菌的液体培养基1000mL，接种乳酸菌，采用静置培养，经过夜培养12～16小时；

(2)菌体收集：吸取1000μL乳酸菌悬液至一新的离心管，然后12000rpm离心1分钟沉淀菌体，并使用移液器去除上清液；

(3)菌体的裂解：往菌体沉淀加入0.1-10％SDS溶液10μL，吹打混匀后，在涡旋振荡器中震荡5分钟裂解乳酸菌；

(4)稀释裂解液：加入490μL的无酶无核酸的灭菌双蒸水或者1×TE溶液，吹打混匀，获得乳酸菌基因组DNA悬液。

上述方法制备获得的乳酸菌基因组DNA悬液可直接用于PCR的乳酸菌DNA模板。每25μLPCR体系加入1.5μL上清液作为反应模板即可。

实施例2

(1)醋酸菌培养：用试管装入已灭菌的液体培养基1000mL，接种醋酸菌，采用静置培养，经过夜培养12～16小时；

(2)菌体收集：吸取1000μL醋酸菌悬液至一新的离心管，然后12000rpm离心1分钟沉淀菌体，并使用移液器去除上清液；

(3)菌体的裂解：往菌体沉淀加入0.1-10％SDS溶液10μL，吹打混匀后，在涡旋振荡器中震荡5分钟裂解醋酸菌；

(4)稀释裂解液：加入490μL的无酶无核酸的灭菌双蒸水或者1×TE溶液，吹打混匀，获得醋酸菌基因组DNA悬液。