[发明专利]野生松茸驯化母种制备方法

说明书

本发明公开了一种野生松茸驯化母种制备方法，包括如下步骤：采集自然野外生长的松茸制备孢子液；加入到液体培养基中进行摇菌，进行液体多孢自交后，将所得的松茸混合菌丝液在洁净室接种于栽培瓶的培养料上，用透气盖封口，置于培养室内暗培养25～30d，并在2～6d时，进行超声波水浴培养；待菌丝长满栽培瓶后，感染处理松茸的优势伴生树种，浇水900ml～1000ml，盖好覆盖物，人工驯化，即可得到稳定性强，可用于繁殖生产的松茸母种。本发明通过培养基和培养方法的合理改进，实现了松茸母种的人工驯化，改变了松茸生产完全依靠自然的现状，而且还实现了松茸产品的稳产、高产和优质。

技术领域

本发明涉及松茸培养领域，具体涉及一种野生松茸驯化母种制备方法。

背景技术

松茸Tricholoma matsutake Sing.是世界著名的野生食用菌之一。近几年来云南出口的松茸已占世界主要市场——日本市场销售量的60％以上，年出口松茸创汇达到4000万美元以上，2004年达到5361万美元，出口量为1280.85吨，其中鲜松茸973.5吨，松茸制品307.35吨。据调查，德钦县和香格里拉县农民经济收入的60％以上来源于松茸。松茸产业的持续、健康发展将为山区农民脱贫致富、边疆少数民族地区的农村经济的发展、社会的稳定提供重要经济保障。

一个多世纪的松茸驯化研究表明，直接采用纯培养菌种实现松茸人工栽培是一种难以实现的目标，为此，非常有必要进行人工驯化栽培技术开发。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种野生松茸驯化母种制备方法。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：

野生松茸驯化母种制备方法，包括如下步骤：

S1、采集自然野外生长的松茸，取发育完全的子实体菌盖部分，切掉菌柄，用75％的酒精棉球擦净菌盖表面，菌褶朝下用灭过菌的铁钩勾住悬挂于灭菌的三角瓶中，用无菌棉塞封口过夜，收集孢子印，用无菌水制成孢子液；

S2、加入到液体培养基中进行摇菌，进行液体多孢自交，摇菌条件为：转速140r/min，培养温度为25℃，得松茸混合菌丝液；

S3、将所得的松茸混合菌丝液在洁净室接种于栽培瓶的培养料上，用透气盖封口，并置于14～15℃的培养室内暗培养25～30d，在2～6d时，进行超声波水浴培养，超声波的频率和功率分别设定为68kHz和600W，超声波处理时间为10min～90min，超声间歇比为20s/5s～30s/5s；

S4、待菌丝长满栽培瓶后，感染处理松茸的优势伴生树种，浇水900ml～1000ml，盖好覆盖物，人工驯化，即可得到稳定性强，可用于繁殖生产的松茸母种。

其中，所述步骤S2中的液体培养基每升含：

葡萄糖20～24g、酵母膏0.3～0.5g、蛋白胨0.5～0.7g、葛仙米冻干粉3～5g、氨基酸螯合镁0.05～0.07g、磷酸二氢钾0.1～0.2g、水溶性淀粉40～60g，其余为无菌水。

其中，所述步骤S3中的培养料通过以下步骤制备：

(1)称取松树木屑36～48份、魔芋粉8～10份、大蒜素0.5～0.6份、风化煤8～10份置于汽爆罐内，先通入氮气至汽爆罐内压力为0.7～1.3MPa，爆破处理8～25min；然后迅速通入蒸汽至汽爆罐内压力为1.3～1.7MPa，蒸汽爆破处理0.5～2.5min，得混合物；

(2)将所得的混合物自然降温至常温后，加入氮化硅超微粉3～7份、甲壳素纤维4～6份、海藻酸纤维3～5份混合搅拌均匀，并通过加入水调整水分含量为总重量的64～68％，得培养基料备用。

其中，所述葛仙米冻干粉通过以下步骤制备：