[发明专利]一种将T淋巴细胞诱导成多能干细胞的方法有效
| 申请号： | 201510895176.2 | 申请日： | 2015-12-07 |
| 公开（公告）号： | CN105296432B | 公开（公告）日： | 2018-11-27 |
| 发明（设计）人： | 陈海佳;葛啸虎;王一飞;罗二梅;张维敏 | 申请（专利权）人： | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N5/071 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人： | 赵青朵 |
| 地址： | 510000 广东省广州市国*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 淋巴细胞 诱导 多能 干细胞 方法 | ||
1.一种将T淋巴细胞诱导成多能干细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：
将含有干细胞转录因子基因的仙台病毒转染T淋巴细胞，获得感染细胞；
将所述感染细胞与饲养层细胞混合，进行第一培养，采用人胚胎干细胞培养基进行第二培养，然后采用饲养层细胞的条件培养基和人胚胎干细胞培养基的混合液进行第三培养，最后采用人胚胎干细胞培养基进行第四培养，获得多能干细胞；
第一培养具体为：将感染细胞与饲养层细胞混合，采用饲养层细胞培养基进行培养，然后弃饲养层细胞培养基；
条件培养基的配方为：P2代MEF细胞的培养上清液。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述干细胞转录因子为OCT4、SOX2、C-MYC或KLF4中的一种或两种以上的混合物。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述转染为在37℃条件下转染24～36h。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述人胚胎干细胞培养基的配方为：DMEM/F12，血清替代物，β-硫基乙醇，1％非必需氨基酸，碱性成纤维生长因子。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述条件培养基与所述胚胎干细胞培养基的体积比为1：(1～1.5)。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述转染采用的助转剂为polybrene。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一培养的时间为1天，所述第二培养的时间为9～11天。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第三培养的时间为8～10天，所述第四培养的时间为7～15天。
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