[发明专利]一种抗肝肾微粒体1抗体检测试剂盒及检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及磁微粒化学发光免疫诊断技术领域，特别是涉及一种抗肝肾微粒体1抗体检测试剂盒及检测方法。

背景技术

近年来，国内外对于自身免疫性肝病的研究越来越深入，并且进展迅速，涉及到发病机理、临床诊断、临床治疗、预后、遗传、以及相关自身抗体及靶抗原的研究。

肝肾微粒体（Liver-kidneymicrosomal,LKM）自身抗体和肝脏炎症疾病有关，LKM自身抗体与自身免疫型慢性活动性肝炎有关，也称为LKM-1自身抗体。LKM-1是一种分子量为50KDa的蛋白，最先被发现于鼠肝中，作为细胞色素P450db1。近来研究报道表明，三种P450细胞色素（A2,D6和C9）可以作为肝炎疾病的自身抗原。三种细胞色素均属于药物代谢酶，可以被自身抗体识别。

类似LKM-1类循环抗体目前已成为检测和诊断自免肝的一类重要靶标，对于自免肝类疾病的诊断变得越来越重要，治疗方式更多的是通过免疫抑制进行，而病毒诱导的肝炎往往是通过注射干扰素进行治疗。因此，区分病毒诱导性肝炎和自身免疫肝炎，对于疾病的治疗十分重要。研究报道，感染病毒性肝炎患者，往往伴随有自身免疫肝炎的发生，因此在进行干扰素治疗前，进行自身免肝诊断是十分有必要的。

目前报道的关于检测LKM-1自身抗体的方法主要有间接荧光抗体（IFA）技术、放射免疫技术（RIA）、电子显微免疫印迹分析技术、酶联免疫分析（ELSIA）。传统的酶联免疫包含LKM阳性参考血清IgG碎片纯化、IgG碎片固相化包被、以及样本反应阶段。

然而，对于此病的检测，这些方法都存在着不足之处：

一、间接免疫荧光法

该法的基本原理是用特异性的抗体与切片中的抗原结合后，继用间接荧光抗体，与前面的抗原抗体复合物结合，形成抗原抗体荧光复合物。在荧光显微镜下，根据复合物的发光情况来确定所检测的抗原。该方法评价：由于结合在抗原抗体复合物上的荧光素抗体增多，发出的荧光亮度强，因而其敏感性强。但是其不足也是明显的：

（1）运用此法可能出现假阳性。

（2）在分析结果时无法根据分子量的大小区分非特异性识别。

（3）操作相对复杂，需要价格较昂贵的荧光显微镜，在很多基层医院难以推广，也不太适用于标本量较多的实验室。

（4）荧光测定中的本底较高，荧光免疫技术用于定量测定有一定困难。

（5）结果判定需要有经验的专业人员，分析结果的客观性不足。

二、酶联免疫吸附法

ELISA检测抗LKM-1抗体，简便易行，特异性高，与间接免疫荧光法联合检测，可为临床对PBC的诊断和治疗提供更为客观的实验依据。但与其他生物检测或免疫检测比较，这种ELISA检测方法、技术、工具或产品仍有较多的不足而使其应用受限，这些不足主要包括以下几个方面：

（1）检测试剂在检测过程中为开放方式，容易引起各种试剂之间的交叉污染而影响检测结果。

（2）ELISA方法多采用辣根过氧化物酶进行检测，其检测范围和灵敏度都较低。

（3）ELISA方法的检测时间通常反应是一件较长，完成一个测试所需的总时间一般在2个小时以上，不能完全满足临床上的快速诊断的需求。

（4）ELISA方法不能随机进样检测，检测结果存在滞后性。

发明内容

本发明主要解决的技术问题是提供一种抗肝肾微粒体1抗体检测试剂盒及检测方法，具有稳定性好，灵敏度高，重复性好等优点。

为解决上述技术问题，本发明采用的一个技术方案是：提供一种抗肝肾微粒体1抗体检测试剂盒，包括生物素化LKM-1抗原、校准品、质控品、AP-抗人IgG抗体、磁微粒试剂、化学发光底物和清洗液，所述生物素化LKM-1抗原为偶联有生物素的LKM-1抗原，所述AP-抗人IgG抗体是AP标记的抗人IgG抗体，所述磁微粒试剂是表面有亲和素SA基团的纳米磁微粒悬浮液。

在本发明一个较佳实施例中，所述生物素化LKM-1抗原是生物素与LKM-1抗原分子表面的-NH₂基团反应得到的。

在本发明一个较佳实施例中，所述校准品是由含抗LKM-1抗体的人血清配制而成，用于得到校准曲线；所述质控品是由含抗LKM-1抗体的人血清配制而成。

在本发明一个较佳实施例中，所述磁微粒试剂中磁微粒的直径为0.1-0.5μm，所述磁微粒具有超顺磁性。