[发明专利]检测甲状腺球蛋白抗体的试剂盒及方法

说明书

技术领域

本发明涉及体外诊断技术领域，特别是涉及一种基于纳米磁微粒化学发光及碱性磷酸酶标记检测甲状腺球蛋白抗体的试剂盒及方法。

背景技术

甲状腺球蛋白（Tg）是一种存在于甲状腺卵泡细胞中的大的异源糖蛋白（MW660,000）。甲状腺球蛋白在甲状腺激素、T3和T4的生物合成中起着非常重要的作用。在甲状腺卵泡细胞中，甲状腺过氧化酶（TPO）对甲状腺球蛋白内的酪氨酰基团的碘化反应中起催化剂的作用。经过碘化的甲状腺球蛋白将保存在卵泡胶体中，充当T3和T4的保存器。当甲状腺受到刺激时，甲状腺球蛋白将会降解，此时甲状腺激素、T3和T4就会释放到血液中。

甲状腺球蛋白自身抗体的检测是鉴定患者是否患有自身免疫性甲状腺疾病的一种有效手段。80-100%患有淋巴瘤性甲状腺炎或慢性甲状腺炎的病人、10-20%患有亚急性甲状腺炎的病人和60-70%患有甲状腺机能亢进的病人，他们的抗Tg抗体水平升高。由于甲状腺球蛋白的异质性，使得抗甲状腺球蛋白抗体在患有其他病症的老年病人以及临床表现正常和甲状腺机能正常的患者身上也同样可以被检测出。还在患有阿狄森氏病（慢性肾上腺皮质机能减退症）和某些I型糖尿病的病人体内检测出抗甲状腺球蛋白抗体。

甲状腺球蛋白抗体现常用的检测方法有放射免疫分析和普通微孔板酶联免疫分析等，但这些方法存在一些问题。放射免疫分析（RIA）存在高放射性、有效期短、给操作者带来的健康隐患及对环境的污染等缺点，普通微孔板酶联免疫分析（EIA）存在精密度差、灵敏度差、无法实现定量检测等缺点，也不容易实现全自动化。

发明内容

本发明主要解决的技术问题是提供一种检测甲状腺球蛋白抗体的试剂盒及方法，具有极易实现全自动化、灵敏度高、精密度高、线性范围宽等优点。

为解决上述技术问题，本发明采用的一个技术方案是：提供一种检测甲状腺球蛋白抗体的试剂盒，包括第一试剂、第二试剂、磁分离试剂、化学发光底物、校准品、质控品和清洗液，所述第一试剂为甲状腺球蛋白标记生物素试剂，所述第二试剂为甲状腺球蛋白酶结合物试剂，所述磁分离试剂为链霉亲和素标记的超顺磁纳米磁微粒试剂。

在本发明一个较佳实施例中，所述第一试剂或者为甲状腺球蛋白标记FITC抗原试剂；所述第二试剂中的所述酶为碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶；所述第一试剂和所述第二试剂中的甲状腺球蛋白为人源性的天然提取抗原或基因重组抗原。

在本发明一个较佳实施例中，所述磁分离试剂为超顺磁纳米磁微粒，磁珠表面为甲苯磺酰基活化，所述磁分离试剂的直径为1.05μm，等电点是pH5.0，在pH7时，电荷为-10mV，铁含量为26%；所述超顺磁纳米磁微粒直接或间接标记链霉亲和素。

在本发明一个较佳实施例中，所述化学发光底物为AMPPD和增强剂的混合物；所述清洗液为浓缩清洗液。

在本发明一个较佳实施例中，所述磁分离试剂的制备方法为：将所述磁微粒用0.04~0.06mol/L、pH值为4.5~5的2-吗啉乙磺酸缓冲液重悬，重悬后磁微粒的浓度为8~12mg/ml；然后加入所述链霉亲和素，在15~40℃下混悬30~60分钟，其中所述磁微粒与所述链霉亲和素的质量比为25~50:1；然后再加入新鲜配制的8~12mg/ml的碳二亚胺水溶液，在15~40℃下混悬2~12h，其中所述2-吗啉乙磺酸缓冲液与所述碳二亚胺水溶液的体积比为10~20:1；磁分离，去上清，用含质量比为0.09~1.1%的牛血清白蛋白、pH值为7~7.5、物质的量浓度为0.009~0.01mol/L的三羟甲基氨基甲烷缓冲液重悬到所述偶联有链霉亲和素的磁微粒的浓度为0.2~1.0mg/ml，即得所述磁分离试剂；