[发明专利]小分子非编码RNAmiR-125b在制备用于治疗肿瘤包绕型血管类型肝癌的药物中的应用

说明书

本发明提供一种小分子非编码RNA miR‑125b在制备用于治疗肿瘤包绕型血管(VETC)类型肝癌的药物中的用途，其中所述miR‑125b的RNA序列为5’‑UCCCUGAGACCCUAACUUGUGA‑3’。本发明通过免疫组化和实时定量PCR(qPCR)检测了人肝癌组织标本，表明肝癌病人组织标本中miR‑125b的低表达与病人组织肿瘤包绕型血管(VETC)类型以及Ang‑2的高表达显著相关；小鼠成瘤实验的结果表明恢复miR‑125b的表达可显著抑制肝癌细胞表达Ang‑2、形成VETC类型血管和转移的能力。而且，miR‑125b与miR‑100同时低表达的肝癌组织中，出现VETC的比例显著更高，Ang‑2的表达也显著更低。因此，miR‑125b可以单独或者联合miR‑100用于制备治疗形成VETC血管类型的肝癌病人的药物。

技术领域

本发明属于基因工程领域，具体涉及小分子非编码RNA miR-125b及其在制备VETC血管类型肝癌治疗药物中的应用。

背景技术

原发性肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是世界上最常见的恶性肿瘤之一，其中50％发生于中国，且发病率和致死率逐年上升，严重危害我国人民的健康。众所周知，易于发生转移是癌症难以根治并导致病人死亡的主要原因。一般认为，肿瘤中微血管密度越高，肿瘤越易于发生血行转移。但是，肝癌的微血管密度与肝癌复发转移的关系仍存在争议。最近我们发现：除毛细管状血管，肝癌中还广泛存在VETC(vessels thatencapsulate tumor cluster，肿瘤包绕型血管)类型血管，它们相连成网，将肿瘤块包绕分隔开。具备VETC血管类型的肝癌病人通常术后复发率更高，生存时间更短。更为重要的是，VETC能够通过与癌旁血管融合释放被VETC分隔的肿瘤块，从而帮助肿瘤发生转移。这提示：VETC血管结构对肿瘤细胞发生转移具有重要的影响，因此制备针对VETC血管类型肝癌的治疗药物具有重要的应用价值。

Sugino等于2002年最早报道了肿瘤中类似VETC的血管结构的存在，他们观察到乳腺癌细胞移植瘤中血管发展成融合的血窦样结构，并包绕肿瘤团块；随后，该课题组在人肝癌、肾癌和甲状腺癌中都观察到融合的血窦样结构的现象。我们之前的报道首次证明了VETC结构是肝癌独立的预后不良预测因素，与肝癌的转移密切相关。至今,关于VETC形成的潜在分子机制知之甚少。分别有两个研究小组发现：乳腺癌细胞株过表达SLPI和黑色素瘤过表达VEGFA可促进肿瘤细胞株成瘤组织中VETC结构血管的形成，但是具体机制不明。最近，我们首次揭示了Ang-2是诱导VETC形成的关键分子，在肿瘤细胞中敲低Ang-2的表达能够显著破坏VETC的形成，并最终导致转移率下降。

Ang-2是血管重塑的重要调控分子，能够通过结合其受体Tie-2，激活下游信号通路，下调内皮细胞中粘附分子VE-Cad的表达，增加血管的通透性，并抑制周细胞的募集，从而阻碍血管成熟。缺少周细胞保护的不成熟血管通常处于一种不稳定的状态，它们通过感受外部信号，决定是出芽还是凋亡。在缺乏促血管生成信号的情况下，Ang-2高表达会导致内皮细胞凋亡，进而发生血管衰退；然而在富含VEGF等促血管生成信号的肿瘤中，Ang-2会促进内皮细胞接受促血管生成信号，诱导内皮细胞的增殖和迁移，引起血管生成。研究表明，Ang-2在多种肿瘤组织中高表达，且其表达水平与患者的生存时间显著负相关。多个基于动物模型的研究表明，抑制Ang-2的活性不仅能够增加肿瘤血管上周细胞的覆盖，使得血管正常化，还显著抑制了移植瘤的血管生成以及肿瘤生长。我们的前期结果表明，抑制肝癌细胞中Ang-2的表达不仅能够抑制VETC的形成，还能够抑制转移。由此可见，Ang-2主要起到促肿瘤的作用，是一个重要的抗血管药物潜在的靶分子。