[发明专利]哺乳动物细胞高效电转染缓冲液及其制备方法有效
申请号: | 201510638518.2 | 申请日: | 2015-09-28 |
公开(公告)号: | CN105154472B | 公开(公告)日: | 2020-01-07 |
发明(设计)人: | 周勇;申友锋 | 申请(专利权)人: | 重庆高圣生物医药有限责任公司 |
主分类号: | C12N15/85 | 分类号: | C12N15/85 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 400039 重庆市九龙坡区二*** | 国省代码: | 重庆;50 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 哺乳动物 细胞 高效 转染 缓冲液 及其 制备 方法 | ||
1.一种哺乳动物细胞电转染缓冲液的制备方法,其特征在于,该方法的工艺步骤如下:
(1)称取8.94g KCl、0.01665g CaCl2、1.74 g K2HPO4、0.475g MgCl2,加入无菌水定容至1升,混合得到Cytosalts溶液;
(2)取50-100份步骤(1)得到的Cytosalts溶液,加入10-25份Opti-MEM培养基,得到混合体系A;
(3)取1-5份RPMI-1640培养基加入到步骤(2)得到的混合体系A中,得到混合体系B;
(4)取1-5份PBS缓冲液加入到步骤(3)得到的混合体系B中,得到混合体系C;
(5)取1-10份浓度为25 mmol/ L、pH值为7.6 的HEPES加入到步骤(4)得到的混合体系C中,得到混合体系D;
(6)取1-10份浓度为2 mmol/ L ATP加入到步骤(5)得到的混合体系D中,得到混合体系E;
(7)取1-10份浓度为5 mmol/ L谷胱苷肽加入到步骤(6)得到的混合体系E中,混合均匀,过滤除菌,得到电转染缓冲液;
以上所加物料的份数均为体积份。
2.根据权利要求1所述的一种哺乳动物细胞电转染缓冲液的制备方法,其特征在于所述的哺乳动物细胞是体外培养的哺乳动物细胞。
3.根据权利要求1或2所述的一种哺乳动物细胞电转染缓冲液的制备方法,其特征在于所述的哺乳动物细胞是体外培养的3T3-L1细胞、CHO细胞、HEK293细胞和A549细胞中的任意一种。
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