[发明专利]具核梭杆菌灭活疫苗和制备方法

权利要求书

1.一种具核梭杆菌灭活疫苗的制备方法，其特征在于包括以下步骤：具核梭杆菌的分离和培养；收集；灭活；乳化制剂；无活菌检测；抗体效价检验。

a、通过购买的标准株或者从临床分离得到的细菌株经过连续传代接种于适宜平板上，分离鉴定得到菌种；

b、将菌种通过适宜平板上增殖细菌，用稀释液洗下，或者将菌种接种于含适宜培养基的厌氧瓶中增殖细菌，通过离心培养基收集细菌，直至最终菌液浓度达到本行业标准。如果上述最终菌液低于本行业标准可进行浓缩直至最终菌液达到本行业标准；

c、菌体灭活；

d、将灭活菌体加入佐剂，通过物理混合方法制备成疫苗；

e、将步骤d制备的灭活疫苗进行细菌培养，结果为无菌生长，即可判定疫苗合格；

f、将步骤e判定合格的灭活疫苗接种于小白鼠，设置实验组和对照组，用步骤d制备的疫苗进行接种，接种疗程结束后可进行取血检测抗体效价。

2.如权利要求1所述，其特征在于所述具核梭杆菌菌株为标准菌株不仅限于编号为ATCC25586或者临床分离到的具核梭杆菌菌株。

3.如权利要求1所述，其特征在于使用了固体平板和液体培养瓶在无氧条件下培养。菌液浓缩的方法为进行高速离心进行菌体和液体分离。

4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述灭活步骤中，处理方法为以下几种：1：加入福尔马林(终含量为1％)，置于30-40℃灭活16-30小时；2：50-80℃灭活2-30分钟；3：取细菌悬液用超声粉碎仪粉碎20-40分钟。

5.如权利要求1所述的制备方法，其特征为乳相为弗氏不完全佐剂、弗氏完全佐剂、脂质体、铝佐剂、粘膜佐剂，乳化过程可以为旋涡振荡器乳化，组织捣碎器乳化、注射器乳化。

6.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述无活菌检验为在无菌条件下，去1ml灭活疫苗用PBS稀释10倍，吸取0.2ml接种于平板上，在37℃下培养48h，均应无菌生长。反之则不合格。

7.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述灭活疫苗每毫升含菌量为20亿-300亿。

8.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述疫苗可应用于人体口腔、食管、胃、大肠、小肠、结肠、直肠方面的感染及身体不适。

9.如权利要求任一项所述制备方法所制备的具核梭杆菌灭活疫苗。