[发明专利]空肠弯曲菌免疫PCR检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物技术和免疫学领域，具体涉及一种检测空肠弯曲菌的免疫PCR检测试剂盒。

背景技术

空肠弯曲菌(campylobacter jejuni enteritis)是1973年Butzler等自腹泻病人粪便中分离出来，目前已认识其为人类腹泻的主要致病菌之一。空肠弯曲菌肠炎的发病率在发达国家超过细菌性痢疾，在发展中国家发病率几乎等同于细菌性痢疾。本菌作为重要的食源性致病菌，随着食物进入肠道后在含微量氧环境下迅速繁殖，主要侵犯空肠、回肠和结肠，侵袭肠粘膜，造成充血及出血性损伤，近年来观察到有些菌株能产生类似霍乱肠毒素，引起肠腔内液体分泌增加。目前空肠弯曲菌的检测主要依赖于国标所规定的生化鉴定，其缺点是操作繁琐、检测周期较长，无法适应大量的样品筛查。

免疫学检测是近年来出现的最快速、准确、稳定的快速检测手段，但国内外目前尚无可运用于检测实践的快速检测产品，该专利以空肠弯曲菌为检测靶标，所要求保护的技术涉及空肠弯曲菌快速检测产品。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于检测空肠弯曲菌的PCR反应管。

本发明的另一个目的是提供一种用于检测空肠弯曲菌的免疫PCR检测试剂盒。

本发明的第一方面是提供了一种用于检测空肠弯曲菌的PCR反应管，所述的PCR反应管包括：

免疫PCR管；和

包被于所述的免疫PCR管管体内壁的抗空肠弯曲菌单克隆抗体，所述的抗空肠弯曲菌单克隆抗体由小鼠杂交瘤细胞系4C9E1G7H3，CGMCC No.8457或3G2D8H3G9，CGMCC No.8766产生。

本发明的第二方面是提供了一种检测试剂盒，所述的试剂盒含有所述的PCR反应管。

在一优选例中，所述的试剂盒还含有容器a，所述的容器a中装有所述的PCR反应管。

在另一优选例中，所述的试剂盒还含有缓冲液、dNTP、TaqDNA聚合酶、ddH₂O、引物、阳性对照和阴性对照。

在另一优选例中，所述的引物包括正向引物和反向引物。

在另一优选例中，所述的阳性对照为灭活的空肠弯曲菌菌液，所述的阴性对照为灭菌的布氏肉汤。

本发明各个方面的细节将在随后的章节中得以详尽描述。通过下文以及权利要求的描述，本发明的特点、目的和优势将更为明显。

附图说明

图1是本发明的试剂盒的使用流程和原理图。

图2是空肠弯曲菌直接PCR梯度稀释检测限研究结果。

其中，M：1000bp DNA ladder；N：阴性对照；1-8号泳道对应的细菌浓度为：1.67×10⁸～1.67×10cfu/mL。

图3是空肠弯曲菌免疫PCR检测试剂盒检测空肠弯曲菌梯度稀释检测限研究结果。

其中，M：1000bp DNA ladder；N：阴性对照；1-8号泳道对应的细菌浓度为：1.67×10⁸～1.67×10cfu/mL。

图4是检测试剂盒特异性的结果。

其中，M：1000bp DNA ladder；N：阴性对照；1-15号泳道分别为：空肠弯曲菌CICC 22937、ATCC 29428、ATCC 33291、ATCC 33560、CICC 6071，金黄色葡萄球菌ATCC 27660，鼠伤寒沙门氏菌ATCC 22956，肠炎沙门氏菌ATCC 13076，单增李斯特菌ATCC 43251，小肠结肠炎耶尔森氏菌ATCC 23715，福氏志贺氏菌ATCC 12022，宋内氏志贺氏菌ATCC 25931，痢疾志贺氏菌ATCC 51329，乙型溶血性链球菌ATCC 10373，阪崎肠杆菌ATCC 29004。

图5是模拟带菌牛奶样品免疫PCR试剂盒检测限研究结果。

A(1)模拟带菌牛奶样品直接PCR检测限研究结果；

A(2)模拟带菌牛奶样品免疫捕获PCR检测试剂盒检测限研究结果；

其中，M：1000bp DNA ladder；N：阴性对照；1号泳道为牛奶样品(不加菌液)；2-8号泳道对应的细菌浓度为：1.67×10²～1.67×10⁸cfu/mL。

图6是模拟带菌酸奶样品免疫PCR试剂盒检测限研究结果。

B(1)模拟带猪肉样品直接PCR检测限研究结果；