[发明专利]一种毒沟褶菌的DNA条形码标准基因及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及物种鉴定领域，具体涉及一种毒沟褶菌(Trogiavenenata)的DNA条形码标准基因及其应用。

背景技术

云南是我国食用菌资源最为丰富的省份之一，其中，裂褶菌和侧耳是人们经常采集和可食用的两种野生菌。然而，在外形上，有种叫毒沟褶菌(Trogiavenenata)，俗称小白菌的蘑菇却与可食用的裂褶菌和侧耳非常相似，极其容易混淆，稍不注意，就会被误当成可食用的野生菌而采食。近年来的研究表明毒沟褶菌含有非蛋白质氨基酸等毒素成分，误食该菌后，轻则头晕、恶心、出虚汗、心跳加速，重则死亡。自1978年以来，云南地区就报道了超过400例不明原因猝死案例。研究人员经过长时间仔细深入的调查和研究，才发现这种最近被命名为的“小白菌”的蘑菇竟然是30多年来导致云南不明原因猝死的主要罪魁祸首。因此，对该物种快速和准确鉴定的研究，可以及时有效地防止人们误食该种蘑菇，或为疑似中毒者提供一种快速鉴定通道，为公共卫生安全提供有效保障。目前，对该菌的鉴定还依赖形态，急需一种标准基因来建立其快速的分子鉴定方法。

发明内容

为克服形态学鉴定毒沟褶菌存在的缺陷，本发明提供了一种毒蘑菇——毒沟褶菌(Trogiavenenata)分子鉴定的标准基因序列及鉴定方法，可以快速准确地将该毒蘑菇从裂褶菌、侧耳等易混淆物种中鉴定出来，从而保证人们食用野生菌的安全性和疑似该毒菌中毒事件的快速和有效鉴定。

为实现上述目的，本发明的技术方案如下：

一种毒沟褶菌的DNA条形码标准基因，条形码标准基因序列SEQIDNO.1:

TCTTGTTCTTAGTGGAGCGAGGATCGGTTCAACGAAATTGTTAAGGAAACATCTACTTTCATCAAAAAGGTCGGATACAACCCCAAGGCCGTCGCTTTCGTTCCCATCTCTGGCTGGCACGGTGACAACATGTTGGAGGAATCTACCAAGTAAGTCTTTAATGGCYGAGCCATATCATGGTTTTGATAATCGCTATCTTAGCATGTCATGGTTCAAGGGCTGGACCAAGGAGACGAAGGCCGGTGTTGTCAAGGGCAAGACCCTTCTMGATGCTATTGACGCCATTGAACCCCCTGTGCGTCCTTCCGACAAGCCCCTCCGTCTTCCCCTTCAGGATGTCTACAAAATCGGTGGTATCGGTACTGTCCCTGTCGGTCGTGTTGAAACCGGTATCATCAAGGCCGGCATGATTGTCACTTTCGCCCCTTCAAATGTCACCACTGAAGTCAAGTCGGTCGAAATGCACCACGAGCAGCTTGAGCAAGGAACCCCTGGTGATAACGTCGGTTTCAACGTCAAGTATGTGTACTTTCCGTTCCCCTTCACCGAATCTCACTTTGTGTCAGAAACGTCTCCGTCAAGGATATTCGTCGTGGTAATGTCGCCTCCGATTCGAAGAACGACCCCTGC。

一种应用权利要求1所述的标准基因进行毒沟褶菌分子鉴定的方法，包括以下4个步骤：

(1)从样品组织中提取基因组DNA；

(2)以步骤(1)所提取的基因组DNA为模板，用毒沟褶菌TEF特异性引物，进行聚合酶链式反应；

(3)对步骤(2)扩增得到的DNA产物进行测序；

(4)将测序结果与基因序列SEQIDNO.1的进行同源性比对，若同源性在99％以上，即可将该样品鉴定为毒沟褶菌(T.venenata)。

进一步，，所述TEF特异性引物的引物序列为：

正向引物TEF-630F:5'CTTGTTCTAGTGGAGCGAGGAT3'；

反向引物TEF-630R:5'TTGGCAGGGTCGTTCTTC3'。

进一步，聚合酶链式反应中，其扩增条件为95℃预变性3min，接下来94℃变性30s，50℃退火1min，72℃延伸1.5min，一共进行30-35个循环，最后72℃延伸10min。

进一步，所述DNA产物的长度为630bp。

一种毒沟褶菌分子鉴定的标准基因及其应用，包括TEF标准基因片段的建立和样品的鉴别步骤；其中：