[发明专利]一种鉴定藏菖蒲和石菖蒲的特异引物对及其方法

说明书

本发明公开了一种准确鉴别藏菖蒲和石菖蒲的特异性引物对及其方法。所述引物对包括引物P1和引物P2，所述引物P1的序列如SEQ ID NO.1所示，所述引物P2的序列如SEQ ID NO.2所示。使用此方法能分别鉴别藏菖蒲和石菖蒲的真伪，只通过简单的DNA提取、PCR特异性扩增、酶切、电泳检测即可完成对样品的鉴别，具有操作简单、特异性强、重复性好等优点，可用于藏菖蒲和石菖蒲药材的快速鉴定。

技术领域

本发明涉及中药材种质的品质鉴定技术领域，具体涉及一种分别鉴定藏菖蒲、石菖蒲的特异引物对及其方法。

背景技术

藏菖蒲、石菖蒲均为《中国药典》2010版的收录品种，藏菖蒲为天南星科植物藏菖蒲Acorus calamus L.的干燥根茎，石菖蒲为天南星科植物石菖蒲Acorus tatarinowiiSchott的干燥根茎。藏族习用药材。藏菖蒲和石菖蒲药材在我国均应用广泛，是药食同源的重要物种，首载于《神农本草经》并沿用至今。在藏区，藏菖蒲的使用和历史都有很大的价值，其被列为一级濒危藏药药材，药材资源缺乏。有温胃，消炎止痛的功效，用于补胃阳，治疗消化不良，食物积滞，白喉，炭疽等症。而石菖蒲作为民间常用药和风俗载体以及其在治疗阿尔茨海默病、、记忆障碍和中风等脑疾病的突出疗效也被大量使用。但是由于藏菖蒲的活性成分α-细辛醚和β-细辛醚对人类的“三致”(致癌、致畸、致突变)毒性，美国FDA(Foodand Drug Administration)明令禁止食用藏菖蒲及其提取物。历史上藏菖蒲和石菖蒲的使用并没有很明确的分隔开来，且因地域广泛造成习用名过多，导致名称混乱。有北美菖蒲A.americanus以及同属物种藏菖蒲Acorus calamus L.、石菖蒲A.tatarinowii Schott、金钱蒲A.gramineus Soland.、茴香菖蒲A.macrospadiceus、金边菖蒲A.tatarinowii Schottvar.flavo-marginatus K.M.Liu等品种和名称，其中茴香菖蒲、金边菖蒲均为石菖蒲的变种，金钱蒲在《中国植物志》英文版中与石菖蒲并为一种。现藏菖蒲和石菖蒲相互混用，在药材市场上有“藏菖蒲”、“水菖蒲”、“石菖蒲”和“菖蒲”等多种叫法，存在同物异名和同名异物的现象。因此，寻找一种简单、高效且可靠的分别鉴定藏菖蒲和石菖蒲的方法显得尤为重要。

发明内容

本发明旨在克服现有技术的不足，提供一种鉴定藏菖蒲和石菖蒲的特异引物对及其方法。

为了达到上述目的，本发明提供的技术方案为：

所述鉴定藏菖蒲和石菖蒲的共用特异性引物对包括引物P1和引物P2，所述引物P1的序列为5'-CGGATGCGGATGTTGGC-3'(SEQ ID NO.1)，所述引物P2的序列为5'-TGGGCTCTTCCCGTTTCG-3'(SEQ ID NO.2)。

所述鉴定藏菖蒲和石菖蒲的方法包括如下步骤：

(1)按常规方法提取待测药材的DNA；用权利要求1所述的引物对扩增待测药材的DNA，得到PCR扩增产物。

(2)藏菖蒲鉴别：向PCR扩增产物中加入限制性内切酶BsrF I(cfr10I，BsrFI与cfr10I互为同工酶，两者酶切位点一致)进行酶切，限制性内切酶BsrF I和其同工酶的酶切位点为5'…R^CCGGY…3'；将酶切后的产物进行琼脂糖凝胶电泳，若在100—200bp出现两个片段(约130bp和193bp)，则供试品为藏菖蒲，若不出现上述两个片段，则供试品不为藏菖蒲；

石菖蒲鉴别：向PCR扩增产物中加入限制性内切酶BsaH I(Hin1I、HgiD I、HgiG I、Acy I或Bbi II，BsaH I与Hin1I、HgiD I、HgiG I、Acy I、Bbi II互为同工酶，其酶切位点一致)进行酶切，限制性内切酶BsaH I和其同工酶的酶切位点为5'…GR^CGYC…3'；将酶切后的产物进行琼脂糖凝胶电泳，若在100—250bp出现两个片段(约114bp和209bp)，则供试品为石菖蒲，若不出现上述两个片段，则供试品不为石菖蒲。