[发明专利]治疗或预防乙肝的细胞毒性T淋巴细胞及其制备方法

说明书

本发明涉及一种用于治疗或预防乙肝的细胞毒性T淋巴细胞及其制备方法。使用CTL抗原复合表位肽激发CTL应答能力，提供有效的特异性CTL效应细胞。本发明还提供了包含所述治疗或预防乙肝的特异性CTL效应细胞或细胞制剂的组合物或试剂盒。

技术领域

本发明涉及一种用于治疗或预防乙肝的细胞毒性T淋巴细胞及其制备方法。

背景技术

乙型肝炎病毒（HBV）是非细胞毒性病毒，侵入机体后可引发特异性免疫反应。CD8⁺特异性细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic T lymphocytes, CTL）是清除肝细胞内HBV感染的主导力量，既能通过释放γ干扰素(interferon γ)和肿瘤坏死因子（tumor necrosis-α,TNF-α）等细胞因子抑制或清除肝细胞内的HBV，又能通过特异性细胞毒作用直接杀伤靶细胞，以清除细胞内的HBV。CD4⁺T细胞可调节CD8⁺T细胞的活性，也能通过释放IFN-γ和TNF-α等细胞因子从而有助于肝细胞内HBV的清除。而HBV特异性T细胞表位，是激发特异性细胞免疫应答的原动力，处于免疫识别和免疫激活的核心位置。

研究发现，引起特异性CTL免疫应答反应的并非完整的病毒抗原分子，而是抗原来源的特异性CTL表位肽，其中，与MHC-I类分子特异性结合的短肽即CTL表位在CTL活化过程中其关键作用。抗原提呈细胞（APCs）摄取HBV抗原蛋白，加工处理形成系列免疫原性的表位（epitope）多肽，其中MHC-I分子与相应表位肽结合可以形成表位肽-MHC-I复合物，并在APCs表面活化CD4⁺和CD8⁺T淋巴细胞，后者在CD4⁺T淋巴细胞的辅助下通过颗粒酶、穿孔素的杀伤途径，或通过FasL诱导肝细胞凋亡途径及通过分泌IFN-γ、TNF-α的非细胞裂解途径等。

由于抗原来源的特异性CTL表位肽具有MHC-I类分子限制性。将抗原加工处理成的CTL表位肽与主要组织相容性复合体MHC-I类分子结合形成多肽-MHC复合物呈递到细胞表面供CD8⁺T淋巴细胞表面的T细胞抗原受体（TCR）识别而被活化，才能引发CTL特异性免疫应答反应。既往的研究发现，HBV相关抗原的免疫显性CTL表位大多是HLA-A0201限制性表位。然而，在我国携带HLA-A1101等位基因的人群占到总人群的近三分之一，是仅次于HLA-A0201高频等位基因的人数比例。但目前关于HBV来源的HLA-A1101限制性CTL表位的研究较少，且由于单一的MHC等位基因背景，在临床上作为乙型肝炎治疗性多肽疫苗应用时具有明显的限制性， 有鉴于此，本研究提供一种组合HBsAg免疫显性HLA-A1101限制性CTL表位和HBcAg的免疫显性HLA-A0201限制性CTL表位肽，同时提供一种表位诱导的特异性CTL效应细胞及其制备方法。

乙肝核心抗原（HBcAg）和乙肝表面抗原（HBsAg）是HBV病毒的主要结构蛋白，其中核心抗原（Hepatitis B core antigen, HBcAg）是机体HBV免疫重要的靶抗原，具有极强的免疫原性，能引起强烈的多克隆、特异性CTL应答，从而清除HBV感染。已有研究证实，比较那些慢性感染患者体内微弱、单一的T细胞反应，能成功清除HBV的急性感染患者中，靶向这两种抗原表位的多种特异性CD8⁺T淋巴细胞更容易被检测到，因而，靶向HBcAg和HBsAg特异性T淋巴细胞反应在控制HBV感染过程中起着非常重要的作用。

随着近年来对HBV基因型的研究发现，乙型肝炎基因型与乙型肝炎病情的进展、临床表现、治疗和预后密切相关。而我国主流HBV基因型与欧美地区存在巨大的差异，我国主要以HBV基因B/C型为主，而欧美地区以基因A/D型为主。基于基因型的差异与HBV感染结局以及临床抗病毒疗效存在着很大差异。