[发明专利]金霉素菌种选育培养基及菌种选育方法

说明书

技术领域

本发明属于生物发酵领域，具体涉及一种金霉素菌种选育培养基及菌种选育方法。

背景技术

金霉素是金色链霉菌(streptomyces aureofaciens)的次级代谢产物，为四环类抗生素，常作为饲料添加剂，对革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌、螺旋体、衣原体、枝原体、立克次氏体等均具有抗菌作用，是一种广谱抗菌素，既可抗病，又可增肥，不良反应较小。随着生物制药领域对四环类抗生素的研究日趋深入，目前以盐酸金霉素和饲料级金霉素为核心的金霉素产品非常适应国内外养殖环境，越来越多的饲料厂把金霉素作为抗生素的首选药品，使其市场容量越来越大，销售前景较为乐观。因此提高金霉素发酵水平，提高经济效益，势在必行。

金色链霉菌属放线菌，一般以孢子的形式保存。由于该菌种选育程序要经过分离、初筛、复筛、稳定性试验，因此选育时间较长，一般在3-6个月之间。另外，进行一次菌种选育挑选菌落一般在50-500个左右，因此摇瓶试验的工作量较大，周期较长。目前，国内金霉素菌种的选育在初筛阶段一般采取二级发酵模式，即将分离好的菌落接入斜面，将生长好的斜面孢子接入种子摇瓶后，培养22-26小时，取生长好的种子液接种发酵瓶，培养5天后放瓶，测定效价。由于初筛种子瓶—发酵瓶是一对一，挑选的菌落越多，需要的摇瓶也越多，工作量就越大，占用的摇床也就越多。很显然，上述方法越来越不经济，甚至成为金霉素生产发展的瓶颈，因此，有必要对现有技术予以改进。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种金霉素菌种选育培养基及菌种选育方法，通过本发明的改进，将菌种选育阶段的二级发酵模式改为一次性发酵，缩短了菌种选育时间，提高了菌种选育效率。

本发明采取的技术方案如下：

1、金霉素菌种选育培养基，所述培养基按质量百分比计，由以下组分组成：玉米淀粉6.0～7.5％、黄豆饼粉3.5～4.5％、酵母粉0.15～0.25％、碳酸钙0.55～0.65％、硫酸铵0.3～0.4％、氯化钠0.2～0.3％、硫酸镁0.02～0.03％、磷酸二氢钾0.02～0.03％，豆油2.86～4.28％，余量为水。

优选的，所述培养基按质量百分比计，由以下组分组成：玉米淀粉6.0％、黄豆饼粉4.0％、酵母粉0.2％、碳酸钙0.6％、硫酸铵0.35％、氯化钠0.25％、硫酸镁0.02％、磷酸二氢钾0.03％、豆油4.28％，余量为水。

优选的，所述培养基按质量百分比计，由以下组分组成：玉米淀粉7.0％、黄豆饼粉3.5％、酵母粉0.25％、碳酸钙0.65％、硫酸铵0.3％、氯化钠0.2％、硫酸镁0.025％、磷酸二氢钾0.025％、豆油2.86％，余量为水。

2、利用上述金霉素菌种选育培养基选育菌种的方法，培养基配制好后，按照7：50的体积比装入瓶中进行灭菌，灭菌条件为0.090～0.105Mpa、120±1℃灭菌30分钟；灭菌完毕后，按试管斜面菌种量的1/20接种，并在220～260转/分的转速下，30±1.5℃恒温培养6天。

本发明的有益效果在于：本发明通过改进金霉素菌种选育过程中的培养基配方，将现有技术中的种子培养、种子发酵培养二级发酵模式变为一次性发酵模式，不仅大大缩短了菌种选育时间，提高了菌种选育效率，还减少了摇瓶和摇床的使用量，降低了成本，降低了菌种被污染的几率，因此，本发明适合大批量菌种筛选。

具体实施方式

下面对本发明的优选实施例进行详细的描述。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。

实施例1

改进后的金霉素菌种选育培养基按质量百分比计，由以下组分组成：

玉米淀粉6.0％、黄豆饼粉4.0％、酵母粉0.2％、碳酸钙0.6％、硫酸铵0.35％、氯化钠0.25％、硫酸镁0.02％、磷酸二氢钾0.03％、豆油4.28％，余量为水。

按35mL/250mL三角瓶的量装入培养基，4g棉塞，二层纱布将瓶口封好，于0.090～0.105Mpa、120±1℃灭菌30分钟。

灭菌完毕后，接种方法：挖块法约1cm²(试管斜面的1/20)，在220～260转/分旋转摇瓶机30±1.5℃恒温培养6天。培养完毕的发酵液呈深棕褐色，稠，pH5.6-7.6，效价不低于16000U/ml，可直接进入下一选育程序。

实施例2

改进后的金霉素菌种选育培养基按质量百分比计，由以下组分组成：