[发明专利]一种多级膜分离技术制备海蜇活性糖蛋白的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种海蜇糖蛋白的制备方法，尤其是一种经过多级膜系统分离纯化的糖蛋白的方法。

背景技术

海蜇，为海生肛肠动物，产于我国沿海各地。按产地分，有南蜇、东蜇、北蜇等品种，以福建、浙江所产最好。调查显示，21世纪头三年福建沿海海蜇年渔获量都在10000t以上。海蜇营养极为丰富，其体内含有较多的蛋白质及钙、磷、碘、铁等无机盐，素有“水产瑰宝”之美称。海蜇不仅可以食用，还是一味治病良药。《本草纲目》中所述，海蜇有清热解毒、化痰软坚、降压消肿等功效，对气管炎、哮喘、高血压、胃溃疡等症均有疗效。因此，海蜇作为一种医食同源的大型生物，其有着重要的经济和食用价值。

大量文献资料报道，海蜇活性肽及活性糖蛋白的分离纯化方法，大都采用提取后醇沉、离心的方法，杂质较多，分子量分布广泛，因而存在提取过程繁琐，成本较高，分子量不明确等问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种工序简单，易于实现工业化生产的多级膜分离技术制备海蜇活性糖蛋白的方法，可获得含量＞80.0%，分子量约为26kD，具有明显的抑制ACE酶活性及抑制溶壁微球菌的作用的海蜇糖蛋白。

为实现上述目的，本发明的解决方案是：

一种多级膜分离技术制备海蜇活性糖蛋白的方法，其步骤包括：

（1）原料的处理：选取新鲜海蜇或者盐渍海蜇为原料，采用组织搅碎机绞碎并用搅拌机搅拌匀浆成糜；

（2）提取：处理后的原料装入提取罐，加入0.3%-0.9%NaCl溶液搅拌提取，料液比W:V为1:1-1:5，温度控制25-75℃，搅拌提取、离心取上清；

（3）分离纯化：上清液采用多级膜系统处理，除去大分子量及小分子量杂质，得到目标糖蛋白浓缩液；

（4）干燥：对糖蛋白浓缩液进行干燥，制得海蜇活性糖蛋白粉末。

所述步骤2是搅拌提取2-7h，以4000-14000rpm的转速离心取上清。

所述步骤4是采用喷雾干燥的方式对糖蛋白浓缩液进行干燥。

所述步骤3进一步在糖蛋白浓缩液加入乙醇配置成乙醇溶液，冷藏静置，离心，得到分子量约为26kD的糖蛋白固体。

所述步骤3是加入乙醇配置成50%-75%的乙醇溶液，4-15℃冷藏静置，以转速为8000-10000rpm离心。

所述步骤4是采用冷冻干燥的方式对糖蛋白糖蛋白固体进行干燥，制得海蜇活性糖蛋白粉末。

所述步骤3中多极膜系统包括顺次连接的膜过滤单元，每个膜过滤单元包括一个膜过滤器，沿物料过滤方向，膜过滤器的膜孔径逐级升高或降低；膜过滤器的入口端经泵连接有大物料罐，膜过滤器的出口端为取样口。

采用上述方案后，本发明可绿色高效的分离纯化海蜇活性糖蛋白，可除去无活性的大分子及小分子杂质，提高了糖蛋白样品的生物活性，为开发高附加值的海蜇产品提供有效方法，为医药、功能性食品、化妆品等方面的应用提供了技术基础。

本发明制备的海蜇糖蛋白具有明显的抑制ACE酶活性及抑制溶壁微球菌的作用。这种糖蛋白具有明显的降压及抑菌活性。

本发明采用多级膜系统分离纯化，除去大分子及小分子杂质，锁定活性分子片段，提高了海蜇的生物利用活性，且测定了此片段物质为糖蛋白。并且多级膜系统操作方便、绿色环保、经济高效，利于实现工业化生产。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做进一步的阐述。

本发明揭示了一种多级膜分离技术制备海蜇活性糖蛋白的方法，包含以下步骤：

（1）原料的处理：选取新鲜海蜇或者盐渍海蜇为原料，采用组织搅碎机绞碎并用搅拌机搅拌匀浆成糜；

（2）提取：处理后的海蜇糜原料装入提取罐，加入0.3%-0.9%NaCl溶液搅拌提取，料液比W:V为1:1-1:5，温度控制25-75℃，搅拌提取2-7h，4000-14000rmp离心取上清；

（3）分离纯化：上清液采用多级膜系统处理，此多极膜系统包括顺次连接的膜过滤单元，每个膜过滤单元包括一个膜过滤器，沿物料过滤方向，膜过滤器的膜孔径逐级升高或降低；膜过滤器的入口端经泵连接有大物料罐，膜过滤器的出口端为取样口，经过去杂浓缩得到目标糖蛋白浓缩液，加入乙醇配置成75%乙醇溶液，4-15℃冷藏静置，8000-10000rpm离心10-20min，得到分子量约为26kD的糖蛋白固体；

（4）干燥：采用冷冻干燥的方法对糖蛋白固体进行干燥，制得海蜇活性糖蛋白粉末；所述的冷冻干操作为常规操作，可在任意型号的冻干机中进行。