[发明专利]一种硫代氧化型辅酶Ⅰ试剂及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生化检测领域，具体的，涉及一种硫代氧化型辅酶Ⅰ(Thio-NAD)试剂及其应用。

背景技术

硫代氧化型辅酶Ⅰ(Thio-NAD)，淡黄色或黄色粉末，在很多脱氢酶的作用下，它们可以传递作用物分子的氢，生成还原型Thio-NADH，Thio-NADH在400nm左右有特异吸收峰，所以临床生化领域中，广泛利用Thio-NAD和Thio-NADH的特点，作为监测生化反应的指标，用来计算被测物的浓度或者活力。例如，在总胆汁酸测定技术中，Thio-NAD可以与3α-HSD一起特异性氧化胆汁酸，生成3-酮类固醇和还原性辅酶(NADH)，体系中有一定量的NADH存在时，又反向生成胆汁酸，每一次循环比原来的反应提高一倍的灵敏度，如此往复循环，从而放大微量的胆汁酸，产生大量的水溶性非染料的硫代还原型辅酶(Thio-NADH)，最后测定生成的Thio-NADH的吸光度变化，测得胆汁酸的含量。此外，Thio-NAD还参与其他的酶循环体系测定样本中某组份的浓度或活力，如欧洲专利EP2460888A1提供的脱氢酶和脱氢酶底物测定方法和试剂、0477001A2提供的高敏肌醇测定方法、美国专利US8440442B2提供的磷酸测定方法、5266463提供高敏左旋肉碱测定方法和试剂。

由于Thio-NAD溶液会进行氧化还原反应，试剂不稳定，这种特性会影响上述试剂的性能。目前还没有一种行之有效的方式来保护Thio-NAD的稳定性。

因此有必要设计一种新的、使Thio-NAD保持稳定的复合试剂。

发明内容

本发明的目的在于克服现有的Thio-NAD溶液稳定性差的缺陷，提供一种在2-8℃开盖使用状态下和在2-8℃度密闭避光存储条件下持续稳定的Thio-NAD试剂。

为达到以上目的，本发明提供了一种硫代氧化型辅酶Ⅰ(Thio-NAD)试剂，所述试剂的组成成分包括：

Thio-NAD、缓冲液、表面活性剂和稳定剂所述缓冲液选自由磷酸盐缓冲液、焦磷酸缓冲液、甘氨酸缓冲液、柠檬酸缓冲液、碳酸盐缓冲液、醋酸缓冲液、2-N-吗啡乙磺酸缓冲液、咪唑缓冲液所组成的组中的一种；所述表面活性剂选自由聚氧乙烯十二烷基醚、聚乙二醇对异辛基苯基醚、聚乙二醇单月桂酸酯、4-壬基苯基-聚乙二醇、烷基聚烯烃基乙二醇醚和烷基聚乙烯乙二醇醚中所组成的组中的一种或两种。

可选的，所述稳定剂选自由NaCl、KCl、MgCl₂和EDTA.2Na和EDTA.2K所组成的组中的一种或多种。

可选的，在所述试剂中，Thio-NAD的浓度为0.01-10mmol/L、缓冲液的终浓度为5-500mmol/L、表面活性剂的浓度按质量体积百分含量(w/v)计为0.05-20％、稳定剂的浓度为0.1-20g/L。

可选的，在所述试剂中，Thio-NAD的浓度为0.5-5mmol/L、缓冲液的终浓度为10-100mmol/L、表面活性剂的浓度按质量体积百分含量(w/v)计为2-10％、稳定剂的浓度为1-10g/L。

可选的，所述试剂的pH为3.0-5.5。

可选的，所述缓冲液为甘氨酸缓冲液和2-N-吗啡乙磺酸(MES)中的至少一种。

可选的，所述表面活性剂为聚氧乙烯十二烷基醚(EMULGEN109P)和聚乙二醇对异辛基苯基醚(曲拉通TX-100)中的至少一种。

可选的所述稳定剂为MgCl₂和EDTA.2Na中的至少一种。

本发明还提供了所述Thio-NAD试剂的应用。

可选的，所述应用包括制备总胆汁酸测定试剂、酶循环法高敏肌醇测定试剂、酶循环法高敏左旋肉碱测定试剂、酶循环法磷酸测定试剂、酶循环法脱氢酶测定试剂等。

通过上述技术方案，本发明所提供的Thio-NAD在2-8℃开盖使用状态下的稳定时间可以达到20-30天。在2-8℃密闭避光存储过程中的稳定时间可以达到10-15个月。

具体实施方式

下面将通过具体实施方式对本发明进行详细说明。需要理解的是以下实施例的给出仅是为了起到说明的目的，并不是用于对本发明的范围进行限制。本领域的技术人员在不背离本发明的宗旨和精神的情况下，可以对本发明进行各种修改和替换。

本发明提供了一种Thio-NAD试剂，所述试剂的组成成分包括：