[发明专利]结核杆菌感染检测的荧光原位杂交检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于医学检测领域，具体涉及一种用于结核杆菌感染检测的荧光原位杂交检测试剂盒。

背景技术

结核病被列为我国重大传染病之一，是严重危害人民群众健康的呼吸道传染病。卫生部全国第五次结核病流行病学抽样调查结果显示，目前我国结核病年发病人数约为130万，占全球发病的14.3%，位居全球第2位。2001～2010年，全国共发现和治疗肺结核患者828万例，其中传染性肺结核患者450万例。

传统上诊断肺结核，有三种途径：（1）痰液及病变组织中查出结核杆菌；（2）结核的病理组织常规检查；（3）胸部X线检查，但该方法不能确诊肺结核，因为肺部其他疾病，如肺炎、肺寄生虫病、肺部肿瘤等病变也可出现类似肺结核病变的肺部X线影像学表现，单凭X线检查，许多病人会误诊误治，不但给病人造成经济上的损失，还会导致病情恶化。痰液及病变组织结核杆菌阳性一般来说是肺结核最可靠的诊断，称为金标准。但是由于检出率低，如果单独以痰液结核杆菌检查作为唯一的诊断标准会造成大部分结核患者的漏诊。

病理学诊断在疾病诊断中的价值逐渐体现出来，变得越来越重要。目前结核病的病理诊断主要靠组织学的特殊形态改变和抗酸染色。组织学存在病变形态不典型、与结节病、肺癌、肺炎等病理组织学形态相似的情况，而且某些细菌的感染也会引起类似结核病的组织形态，因此容易误诊。抗酸染色由于针对的是所有抗酸杆菌，特异性不强，染色阳性者还须与其它非致病的抗酸杆菌进行鉴别，而且受实验条件的影响很大，如脱蜡不净、酒精、初染温度、背景等，很容易出现结果的假阴性，造成误诊。长期以来由于诊断技术的不足，全国约有50%的肺结核病人未能及时确诊及时治疗，给健康人群构成巨大威胁。因此，建立一种可以辅助病理医生从疑似肺结核患者的肺活检组织中快速、明确诊断出是否存在结核杆菌感染的方法就显得尤为必要。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种高灵敏度、高可信度同时又非常直观的结核杆菌感染检测试剂盒及其检测方法。

本发明通过以下技术方案实现上述目的：

一种用于结核杆菌荧光原位杂交检测的分子探针；分别为IS6110探针，其序列如SEQIDNO：1所示；MPRT40探针，其序列如SEQIDNO：2所示；和16srRNA其序列如SEQIDNO：3所示。

用于结核杆菌感染检测的荧光原位杂交检测试剂盒，其组成包括：杂交液、DAPI复染剂，和分隔并集中包装这些试剂瓶或管的包装盒。

在本发明的一个实施方案中，所述杂交液含有荧光标记的三种特异探针，分别为IS6110探针，其序列如SEQIDNO：1所示；MPRT40探针，其序列如SEQIDNO：2所示；和16srRNA探针，其序列如SEQIDNO：3所示；三种探针的浓度分别为10-50pM；进一步优选为30pM。

在本发明优选的实施方案中，所述杂交液的具体组成为：10%(w/v)硫酸葡聚糖，10mMNaCl，20%(v/v)甲酰胺，0.1%(w/v)焦磷酸钠，0.2%(w/v)聚乙烯基吡咯烷酮，5mMNa2EDTA，0.1%(v/v)TritonX-100，50mMTris/HCl(pH7.5)；分别为30pM的所述荧光标记的三种特异探针。

所述DAPI复染剂的主要成分为DAPI（4,6-二脒基-2-苯吲哚盐酸）和抗褪色液。

每次检测都必须同时进行质控片操作，质控片必须和病例样本一同操作。质控片可以购买商品化对照片或者选择已知的对照样本自行制备。

本发明的试剂盒能够用于检测的样本范围广泛，包括但不限于，痰、咽拭子、胃灌洗液、支气管灌洗液、活体组织、吸引物、咳出物、体液(脊髓、胸腹水、心包液等)、血液、脓液、骨髓、尿液、组织切片、食物样本、来自土壤、空气和水的样本，以及它们的培养物。这些样本经相应处理后，原则上是只要保持细胞形态完整并且靶核酸未被破坏，均可使用本发明的试剂盒进行检测。这些样本的处理方法是本领域技术人员所掌握的，例如：

痰：痰液涂片法；

脓液：同痰液涂片法；

病灶组织：对病灶组织进行切片；

尿液：留全量夜尿，静置4～5h后，弃上清液，取沉淀部分尿液10ml，3000rpm，离

心30min，取沉淀物涂片；

胸、腹水标本：参照尿液涂片法；

脑脊液：无菌操作收集脑脊液，放置冰箱或室温24h，待薄膜形成后涂片。也可将脑脊液离心沉淀，3000rpm，离心30min，弃上清液，取沉淀物涂片。

本发明与现有技术相比具有如下优点：