[发明专利]一种镍-IgG螯合物及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及检测领域，更具体地说，涉及一种镍-IgG螯合物及其制备方法和应用。

背景技术

IgG主要由脾、淋巴结中的浆细胞合成和分泌，以单体形式存在。在个体发育过程中机体合成IgG的年龄要晚于IgM，在出生后第3个月开始合成，3～5岁接近成年人水平。IgG是血清中主要的抗体成分，约占血清总Ig的75％。IgG是唯一能通过胎盘的Ig，在自然被动免疫中起重要作用。此外IgG还具有调理吞噬、ADCC和结合SPA等作用。由于IgG上述特点，IgG在机体免疫防护中起着主要的作用，大多数抗菌、抗病毒、抗毒素抗体都属于IgG类抗体。应用对麻疹、甲型肝炎等有免疫力的产妇或正常人丙种或胎盘球蛋白可进行人工被动免疫，能有郊地预防相应的传染性疾病。

镍作为一种常见的有毒金属，广泛应用于生活、生产之中，包括生产硬币、珠宝、镍合金不锈钢、制造Ni-Cd电池等，与人们的生活息息相关。随着科技的进步，人们将镍作为催化剂用于生产碳纳米颗粒的生产之中，又进一步加深了镍对于人类的影响。对于普通人群，镍主要是通过食入、饮入、接触等方式摄入镍，当然吸烟也是一重要途径。研究发现，过量的镍会导致机体多处组织及器官损伤，导致多种疾病的发生，包括呼吸系统疾病(肺炎、支气管炎、肺纤维化、哮喘、肺水肿等)、心血管疾病、肾脏疾病、皮肤疾病等，甚至还会导致肿瘤的发生。

流行病学资料显示，长期接触镍的工人，其患呼吸系统肿瘤的几率大大增加，并且其因呼吸系统肿瘤致死的几率也大大增加。动物模型、体外模型试验也发现，镍可以诱导肿瘤的发生。1990年，国际癌症研究机构(International Agency for Research on Cancer，IARC)已将镍化合物作为第一类致癌物质(Group 1)，将金属镍作为2B类致癌物质(Group 2B)。可见，镍严重威胁人体的健康。

关于镍中毒，特别是慢性镍中毒的评价，仅能通过检测血镍含量，间接反应人体内的循环镍含量，无法进一步评估镍对于机体功能的损伤程度，而随着科学技术的飞速发展，镍与人体的关系也日益紧密，因而寻找一种可以从机体功能角度评价镍中毒，特别是慢性镍中毒对于机体的损害程度的评价方式日益重要。

发明内容

针对镍污染严重的问题，本发明的目的在于提供一种镍-IgG螯合物及其制备方法，并建立镍-IgG螯合物的定性、定量检测方法，以便定量检测镍-IgG螯合物在评价一个地区镍污染程度的应用。通过定量检测一个地区人群血清中镍-IgG螯合物可以间接反映这个地区人群受镍污染的情况，从而间接反映这个地区镍污染程度。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：提供一种镍-IgG螯合物，镍离子与IgG通过巯基或/和半胱氨酸残基螯合而成。

本发明还提供一种上述的镍-IgG螯合物的制备方法，包括以下步骤：

A)镍与IgG的螯合反应：在人源的IgG中加入镍离子进行螯合反应，得到反应溶液；

B)纯化镍-IgG螯合物的提取：采用免疫亲和层析法，去除反应溶液中未反应的IgG以及多余的镍离子，即得镍-IgG螯合物。

其中，体外合成法中所述步骤B)具体如下：

(1)溶解样品：向经过步骤A)得到的反应溶液中加入生理盐水，使镍-IgG螯合物复溶；

(2)平衡层析柱：使用稀释缓冲液冲洗层析柱的管路，在层析柱中装入能与IgG特异性结合的填料，装柱后，继续使用稀释缓冲液平衡层析柱；

(3)上样：待层析柱平衡后，用稀释缓冲液稀释步骤(1)中样品，然后上柱，IgG与填料特异性结合；

(4)洗脱：使用稀释缓冲液冲洗层析柱至基线平衡，然后使用0.05-0.1mol/L的磷酸盐溶液进行洗脱；

(5)收集：收集经过步骤(4)洗脱后的洗脱液，收集完毕后立即使蛋白复性；

(6)透析：将步骤(5)中的收集的洗脱液，装透析袋，用ddH₂O透析除盐，换水三次后，4℃透析过夜，收集样本；

(7)平衡层析柱：采用新的层析柱，用稀释缓冲液冲洗管路，在该层析柱中装入能与镍特异性结合的填料，装柱后再用稀释缓冲液平衡层析柱；

(8)上样：待层析柱平衡后，用稀释缓冲液稀释步骤(6)中样本，然后上柱；

(9)洗脱：使用稀释缓冲液冲洗层析柱至基线平衡，然后使用0.5-1.0mol/L的磷酸盐溶液进行洗脱；

(10)收集：收集经过步骤(9)洗脱后的洗脱液，收集完毕后立即使蛋白复性；