[发明专利]一种生物法合成(R)-(-)-扁桃酸的方法

权利要求书

1.一种生物法合成(R)‐(‐)‐扁桃酸的方法，其特征在于：包括如下步骤：

将扁桃腈流加入转化液中，在pH为6.0‐9.0和温度为20‐40℃的条件下反应20‐24h，停止流加并继续反应2‐6h，得到(R)‐(‐)‐扁桃酸；

所述的转化液含有用于分泌J2315腈水解酶的E.coli工程菌。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：将所述的扁桃腈以第一流加速度流加10‐12h，在剩余的反应时间内以第二流加速度进行流加，所述的第一流加速度大于所述的第二流加速度。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述的第一流加速度为10‐40gL^‐1h^‐1，所述的第二流加速度为5‐20gL^‐1h^‐1；

优选地，所述的第一流加速度为15‐35gL^‐1h^‐1，所述的第二流加速度为7.5‐17.5gL^‐1h^‐1；

更优选地，所述的第一流加速度为20‐30gL^‐1h^‐1，所述的第二流加速度为10‐15gL^‐1h^‐1；

最优选地，所述的第一流加速度为24gL^‐1h^‐1，所述的第二流加速度为12gL^‐1h^‐1。

4.根据权利要求1至3中任一所述的方法，其特征在于：所述的转化液的制备方法包括如下步骤：

(1)、将所述的E.coli工程菌在发酵培养基中进行扩增培养，离心以得到静息细胞；

(2)、收集所述的静息细胞，并将其悬浮在pH为6.0‐9.0的缓冲液中，得到所述的转化液。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：在步骤(1)中，所述的发酵培养基的组分及含量如下：酵母膏16‐60gL^‐1、蛋白胨12‐80gL^‐1、甘油1‐500mlL^‐1、K₂HPO₄24.75gL^‐1、KH₂PO₄3.47gL^‐1、MgSO₄1gL^‐1。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：在步骤(2)中的转化液中，所述的静息细胞的浓度大于10gL^‐1，优选为10‐100gL^‐1，更优选为10‐50gL^‐1，最优选为10‐20gL^‐1。

7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤(2)中的缓冲液为NaH₂PO₄/Na₂HPO₄缓冲液、KH₂PO₄/K₂HPO₄缓冲液中和Tris‐HCl缓冲液的任意一种；或者，步骤(2)中还添加了助溶剂，所述的助溶剂为体积分数为1％‐25％的甲醇、乙醇、异丙醇和正己烷中的任意一种或几种；

优选地，步骤(2)中的缓冲液的浓度为20‐200mM；或者，所述的助溶剂的体积分数为5％‐10％。

8.根据权利要求1至3中任一所述的方法，其特征在于：所述的pH为7‐8.5，优选为7.9‐8.1。

9.根据权利要求1至3中任一所述的方法，其特征在于：所述的温度为25‐37℃，优选为30℃。