[发明专利]一种乌洛托品分子印迹固相萃取柱的制备方法及应用

说明书

技术领域：本发明属于食品安全检测技术领域，特别涉及一种乌洛托品分子印迹固相萃取柱的制备方法及应用。

背景技术：

乌洛托品化学名称为六亚甲基四胺，纯品为白色细粒状结晶，分子式为C₆H₁₂N₄，工业上可用作酚醛塑料的固化剂、氨基塑料的催化剂等，由于其在酸性溶液中能分解放出甲醛和氨而具有杀菌作用，医学上常用于泌尿系统的消毒剂。有研究表明乌洛托品具有中等毒性，刺激皮肤，能引起皮炎及皮肤湿疹。由于乌洛托品具有杀菌作用，近年来，在执法过程中发现部分食品生产商，将其应用于食品的生产，添加到米线和腐竹等食品中，促使其色泽光亮，保质期长。2010年3月乌洛托品被全国食品安全整顿工作办公室列入食品中可能违法添加的非食用物质名单(第四批)。

在食品安全检测技术领域中，样品前处理的效果直接关系到分析结果的确准性，固相萃取技术是近年发展起来的一种新型样品前处理技术，主要用于样品的分离、纯化和富集，能更有效地将待测组分与样品基体或干扰物质分离，简化样品前处理的步骤，避免了使用大量有机溶剂，具有操作简便、快速、分离效率高等优点。在食品安全检测技术领域中已被广泛应用，成为样品分离纯化的重要技术。

目前常用的固相萃取柱通常为硅胶基质的填料、离子交换型填料、有机基质的填料和无机吸附型的填料等。这些填料的特异性不强，分离度较低，分子印迹固相萃取技术，利用分子印迹聚合物的特异性吸附机理制备固相萃取填料，由于分子印迹聚合物对模板分子具有特异选择性和亲合性，可以克服食品基质的复杂性，实现低浓度目标物的分离与富集，提高固相萃取的净化效果及分析检测技术的准确度。

发明内容：

为了解决传统的固相萃取柱分离富集乌洛托品效果不佳的缺陷，本发明提供了一种新的乌洛托品分子印迹固相萃取柱的制备方法，并优化确定了该发明固相萃取柱的使用条件。

技术方案：

乌洛托品分子印迹固相萃取柱的制备方法，该方法的步骤如下：

（1）将模板分子乌洛托品、功能单体2-甲基丙烯酸、交联剂2-甲基-2-丙烯酸-1,2-乙二醇酯，充分溶解于致孔剂中，再加入引发剂2,2'-偶氮二异丁腈。模板与功能单体的摩尔比为1:6，功能单体与交联剂的摩尔比为1:10，引发剂与功能单体的摩尔比为1:20，致孔剂为比例为1:1的甲醇/乙腈；

（2）向混合溶液中充入氮气除氧，密闭后于50℃水浴条件下振荡反应8小时，取出块状聚合物研磨，过100~200目筛，收集聚合物颗粒，采用比例为1:4的乙酸/甲醇混合溶剂对聚合物颗粒抽提18小时，除去多余的模板分子，再用纯甲醇抽提6小时，60℃真空干燥得到乌洛托品分子印迹固相萃取填料；

（3）将上述的乌洛托品分子印迹固相萃取填料应用于制备固相萃取柱，将100~500mg的乌洛托品分子印迹聚合物，填充于固相萃取空柱内，两端分别装上聚乙烯筛板，该萃取柱的体积为3~6mL。

将上述的乌洛托品分子印迹固相萃取柱应用于食品检测中，分离富集食品中的乌洛托品，具体的应用包括以下步骤：

（1）固相萃取柱装填好后，依次用1个柱体积的甲醇和1个柱体积的乙醇活化柱体；

（2）称取食品样品5~10g，加入50mL提取溶剂甲醇、乙醇、乙腈、水中的一种或两种的混合溶剂，振荡混匀，快速定性滤纸过滤，收集滤液用于净化；

（3）取1~2个柱体积的样品提取液上样注入固相萃取柱；

（4）用1个柱体积的乙醚清洗柱体，以除去食品基质中的杂质；

（5）最后用2~3个柱体积的甲醇、乙醇、乙腈、水中的一种或两种的混合溶剂为洗脱溶剂，洗脱乌洛托品，收集洗脱液，采用液相色谱仪或液质联用仪进行测定。

进一步地，一种乌洛托品分子印迹固相萃取柱在食品检测中的应用，操作步骤如下：

（1）向已使用过的乌洛托品分子印迹固相萃取柱中，注入3~5个柱体积的比例为1:4的乙酸/甲醇混合溶剂，清洗柱体内残留的乌洛托品分子与杂质；

（2）用2~3个柱体积的甲醇清洗柱体，以除去残留的乙酸；

（3）按上述方法处理后的分子印迹固相萃取柱，可再次应用于食品中乌洛托品的分离、富集与纯化。