[发明专利]检测EZH2基因的引物和方法

说明书

技术领域

本发明属生命科学和生物技术领域，特别涉及检测EZH2基因第7、8、17号外显子突变率的引物，采用普通PCR技术和Sanger测序，可用于快速检测骨髓增生异常综合征患者体内EZH2基因多态位点的突变情况。

背景技术

骨髓增生异常综合征(MDS)是一组异质性克隆性疾病，其特征是血细胞减少，髓系细胞一系或多系发育异常，无效造血，骨髓造血功能衰竭以及演变为急性髓系白血病的风险增加，近年来发现MDS患者存在表观遗传调节子(epigenetic regulator)基因如EZH2等基因的突变，提示这些基因的突变可能参与了MDS的发生。

EZH2基因位于人类第7号染色体上，总长76978bp，共20个外显子。EZH2基因编码的蛋白为一组蛋白甲基转移酶。EZH2基因在MDS中突变率达6％，多亚型均可见，难治性贫血(RA)是MDS相对早期阶段，在这类患者中检测到EZH2突变，说明该基因异常是疾病发生的早期事件。EZH2基因可能参与MDS发病机制，Bejar等运用基因测序及质谱基因分型法对493例诊断为MDS的患者检测了18种基因的点突变，对这些突变进行COX多因素回归分析发现，EZH2突变与患者的外周血小板数减少、血红蛋白含量降低、骨髓幼稚细胞数量增加有明确联系，EZH2突变对整体生存率有预后不良的趋势。另外Nikoloski等和Ernst等通过对EZH2发生的缺失、错义及移码突变的研究发现，EZH2突变是髓系恶性血液病(包括MDS)的不良预后指标。目前导致MDS的具体机制尚不明确，但对EZH是的突变检测无疑能一定程度上提示不良预后。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测EZH2基因多态突变热点的引物，采用PCR技术，可用于快速检测骨髓增生异常综合征患者体内EZH2基因多态位点的突变情况。所述检测EZH2基因多态热点突变情况的引物，包括：

扩增EZH2基因的引物，其碱基序列为：

EZH2-7F：TGTAAAACGACGGCCAGTTTTTGTTTTTGACTGACTGGCA

EZH2-7R：AACAGCTATGACCATGAAACAAAGTGTAGTGGCTCATCC

EZH2-8F：TGTAAAACGACGGCCAGTATTCTTGATAACACCATGCACAA

EZH2-8R：AACAGCTATGACCATGCAGAGCAATCCTCAAGCAACA

EZH2-17F：TGTAAAACGACGGCCAGTGGTCCAGTATTCACTCTGTGCG

EZH2-17R：AACAGCTATGACCATGCACTGACCTCTACCCTCGTTTC。

进一步地，还包括测序引物，其碱基序列为：

检测EZH2基因的测序引物碱基序列为：

CQ F：TGTAAAACGACGGCCAGT

CQ R：AACAGCTATGACCATG。

进一步地，引物序列EZH2-7F和EZH2-7R是扩增EZH2基因第7外显子序列的引物，引物序列EZH2-8F和EZH2-8R是扩增EZH2基因第8外显子序列的引物，引物序列EZH2-17F和EZH2-17R是扩增EZH2基因第17外显子序列的引物。

本发明还提供了检测EZH2基因第7、8、17号外显子突变情况的方法，包括以下步骤：

1.抽提血液/中的DNA；

2.用PCR扩增步骤1中提取的DNA；

3.对步骤2中的扩增产物进行测序；

4.对测序结果进行判断，确定EZH2基因是否发生突变；

其中PCR扩增引物为：

扩增EZH2基因的引物，其碱基序列为：

EZH2-7F：TGTAAAACGACGGCCAGTTTTTGTTTTTGACTGACTGGCA

EZH2-7R：AACAGCTATGACCATGAAACAAAGTGTAGTGGCTCATCC

EZH2-8F：TGTAAAACGACGGCCAGTATTCTTGATAACACCATGCACAA

EZH2-8R：AACAGCTATGACCATGCAGAGCAATCCTCAAGCAACA

EZH2-17F：TGTAAAACGACGGCCAGTGGTCCAGTATTCACTCTGTGCG

EZH2-17R：AACAGCTATGACCATGCACTGACCTCTACCCTCGTTTC。

进一步地，测序引物碱基序列为：