[发明专利]一种利用超声波处理提取河豚鱼DNA的方法

权利要求书

1.一种利用超声波处理提取河豚鱼DNA的方法，其特征在于：所述方法步骤包括如下：

1）合成引物对；

2）河豚鱼DNA样品中加入CTAB裂解缓冲液，在功率100%的超声波清洗器中65 ℃恒温温浴处理，处理时间为5 -25 min，各处理重复3次；

3）将获得DNA样品用于PCR扩增，通过PCR产物电泳图谱，鉴定处理的DNA提取结果。

2.根据权利要求2所述的一种利用超声波处理提取河豚鱼DNA的方法，其特征在于：

所述引物对为HT-1F：5'-TGCCTCAACTACAAGAACCTAATGG-3'；HT-1R：5'-GGGAAGGACATAGCCCACGA-3'。

3.根据权利要求2所述的一种利用超声波处理提取河豚鱼DNA的方法，其特征在于：

步骤2）具体为：称取100 mg样品于2.0 mL离心管中，加入600 μL 2 % CTAB溶液和蛋白酶K 15 μL，在超声波清洗器中温育处理5 -25 min及在水浴锅中65℃常规温浴过夜处理；在离心管中加入600 μL三氯甲烷，13400 r·min^-1条件下离心15 min，取上清，加入2倍体积的0.5 % CTAB溶液，颠倒混匀，室温静置约1.5 h；在13400 r·min^-1条件下离心25 min，取沉淀，加入400 μL NaCl 溶液，沉淀溶解完全后，加入15 μL Rnase 酶37 ℃条件下温浴约1.5 h；加入等体积的三氯甲烷、饱和酚、异戊醇混合液，颠倒数次充分混合后，在13400 r·min^-1条件下离心15 min，重复此操作三次；取上清，加入0.8倍异丙醇和1/10体积的NaAc溶液，涡旋30 s，充分混合后，在13400 r·min^-1下离心15 min；取沉淀，加入400 μL 70 % 乙醇，上下颠倒使沉淀悬于溶液中，在13400 r·min^-1条件下离心洗涤沉淀10 min；经DNA浓缩仪干燥10 min，加pH 8.0、100 μL TE 在65 ℃条件下溶解15 min，放入4 ℃冰箱保存待用。

4.根据权利要求3所述的一种利用超声波处理提取河豚鱼DNA的方法，其特征在于：所述的三氯甲烷：饱和酚：异戊醇体积比为25：24：1。