[发明专利]肿瘤特异性和可热调控的siRNA表达载体及其制备方法和应用有效
| 申请号： | 201510278224.3 | 申请日： | 2015-05-27 |
| 公开（公告）号： | CN104830904B | 公开（公告）日： | 2019-04-02 |
| 发明（设计）人： | 唐丽灵;冯京;廖意;武艳娇;李丽;孙维超 | 申请（专利权）人： | 重庆大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/113;A61K48/00;A61P35/00;C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京同恒源知识产权代理有限公司 11275 | 代理人： | 赵荣之 |
| 地址： | 400044 重*** | 国省代码： | 重庆;50 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 肿瘤 特异性 调控 sirna 表达 载体 及其 制备 方法 应用 | ||
1.肿瘤特异性和可热调控的siRNA表达载体在构建靶向干扰肿瘤治疗基因表达的载体中的应用，其特征在于：所述siRNA表达载体含有由肿瘤特异性启动子和热休克元件调控表达的siRNA表达框；所述肿瘤特异性启动子为人端粒酶逆转录酶启动子，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述热休克元件为HSE（MN）或HSE（XY），所述HSE（MN）的核苷酸序列如SEQID NO.4所示，所述HSE（XY）的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；所述siRNA表达框的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示；其构建方法如下：
a.克隆获得人端粒酶逆转录酶启动子，然后合成热休克元件，所述热休克元件的核苷酸序列如SEQ ID NO.4或SEQ ID NO.5所示；
b.将步骤a克隆的人端粒酶逆转录酶启动子和热休克元件替换pMHSP70psil质粒的HSP70启动子，所述热休克元件位于所述人端粒酶逆转录酶启动子5’端；再将SEQ ID NO.8所示序列连入启动子的3’端，得肿瘤特异性和可热调控的siRNA表达载体。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：步骤a中，克隆人端粒酶逆转录酶启动子的扩增条件为95℃预变性5min；95℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸30s，30个循环；最后72℃延伸10min，4℃保存。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述肿瘤治疗基因为SNCG基因。
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