[发明专利]一种脐带间充质干细胞注射液及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体涉及一种脐带间充质干细胞注射液及其制备方法和应用。

背景技术

缺血性心脏病(ischemic heart disease，IHD)是由于冠状动脉循环改变引起冠状动脉血流与心肌细胞需求之间不平衡而导致的心肌损害。尽管近年来，经皮冠状动脉介入治疗(PCI)、冠状动脉搭桥术(CABG)及药物治疗取得了长足的发展，但缺血性心脏病仍然是世界范围内的头号死因，有20％的病例因冠脉病变严重或弥漫，常规药物治疗效果不佳且无法手术治疗，IHD病患也被称为“无选择权(No-option)”患者。慢性缺血性心脏病的临床处置方式有限，疗效和预后较差，需要寻找更加有效的新型治疗方式。最近，实验和临床研究表明，干细胞治疗IHD潜力巨大，但是大多数研究多集中在急性缺血领域，而慢性缺血性心脏病研究较少。

近年来，干细胞研究的进展为多种慢性和顽固性疾病的治疗提供了新的策略。鉴于安全性考虑，目前间充质干细胞在临床前和临床研究中安全性记录良好，已经有部分疾病如移植物抗宿主病(GvHD)将间充质干细胞(MSC)引入临床治疗。MSC可来源于多种组织，目前常用的MSC为骨髓来源。已经有研究表明，骨髓来源的MSC(BM-MSCs)可以用于心脏损伤的修复，临床研究的结果也显示出巨大的前景。多个临床前研究表明，BM-MSCs治疗后可提高心功能和减少梗死面积。然而，也有研究发现，高龄和疾病会影响干细胞的数量和质量，治疗老年人的干细胞用于治疗损伤的心脏效果比治疗年轻人的干细胞差。此外，抽取骨髓的具有创伤性、病毒污染的风险和有限的骨髓供者都限制了BM-MSCs的应用。目前已经有研究采用其他来源如脂肪组织，脐带组织来源间充质干细胞，也取得了良好的效果。脐带华通氏组织具有丰富的MSCs，且具有取材无损伤、细胞产量高、增殖能力强等特点。有研究表明，脐带华通氏胶来源MSC(WJ-MSCs)具有分化为多种细胞的潜能，包括心肌细胞。

目前脐带间充质干细胞制备主要通过新生儿脐带经过消化进行制备，但大规模的需求量需要更高效率的制备方法，目前针对心脏类疾病研究与使用中的脐带间充质干细胞的公开技术有：CN 101690731 B脐带华通胶源间充质干细胞在制备因冠心病及扩张性心肌病引起的心力衰竭细胞移植材料中的应用，该发明提供了将新鲜制备或经液氮冻存处理后的间充质干细胞经复苏后再次培养，再与氯化钠注射液等混合进行输注或注射的方法；但此方法在8-24小时后细胞活性即大幅下降，无法长期保证细胞活性；另外还需要进行治疗的机构设立有无菌的细胞培养中心与专业的细胞培养制备人员，每一次治疗均要单独培养，不同操作人员的操作差异带来的细胞质量不统一，并且增大了染菌污染的风险。CN 102908364A公开了一种间充质干细胞注射液及其制备方法和在制备治疗儿童扩张型心肌病药物中的应用，，间充质干细胞注射液含有：2×10⁵-1×10⁷个/mL的间充质干细胞，体积比为5-8％的临床级DMSO，1-6％的人血白蛋白和复方电解质溶液。

细胞治疗途径与治疗效果密切相关。目前用于干细胞治疗最常采用的移植方式有三种，分别是心肌内、冠脉和静脉注射。每种移植方式都有利有弊，心肌内注射能够将细胞直接注射至损伤的心肌，可提高细胞局部植入率，但是它要求复杂的设备和高超的手术技巧。冠脉内注射创伤小，并且被广泛应用于临床，操作方便，但有报道认为细胞滞留率下降。心肌内注射与冠脉内注射的优劣目前仍然有争议。静脉注射在干细胞治疗的临床研究中被广泛采用，而且简单安全，但在心脏疾病治疗方面，有研究认为静脉注射后大多滞留在肺部，所以很难归巢到心脏，不能起到治疗效果。但是，有研究发现，静脉移植细胞也能够提高心功能并且减少梗死面积，并认为这可能与细胞滞留在肺组织后分泌的TSG6有关。TSG6能促进心脏损伤的修复，但单一给药方式无法满足复杂的缺血性心脏病病情，因此为了进一步提高治疗效果，采取新的多种方式联合给药亟待突破。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种冻存后复苏效果极佳的脐带间充质干细胞注射液及其制备方法和应用；

本发明的目的之二在于提供一种能用于制备治疗慢性缺血性心脏病药物的脐带间充质干细胞注射液及其制备方法和应用。

第一方面，本发明提供一种脐带间充质干细胞注射液，脐带间充质干细胞和混合溶液，所述混合溶液包括：电解质平衡液、羟乙基淀粉、三磷酸腺苷二钠-氯化镁、二甲基亚砜和人血白蛋白。