[发明专利]一种增强D-苯基乳酸产量的D-LDH-FDH融合基因的构建与表达

权利要求书

1.一种增强D-苯基乳酸产量的D-LDH-FDH融合基因的cDNA序列，其特征在于：由D-LDH基因、连接肽的DNA序列和FDH基因串联而成，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，编码SEQID No.2所示的氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述的cDNA序列，其特征在于：所述的核苷酸序列中1-996bp来自D-LDH基因，序列996bp；997-1041bp为连接肽的DNA序列，共45bp；1042-2133bp来自FDH基因，序列1092bp。

3.根据权利要求1所述的cDNA序列，其特征在于：所述的连接肽的DNA序列如SEQ IDNo.3所示，编码的氨基酸序列如SEQ ID No.4所示，包括12个甘氨酸和3个丝氨酸。

4.权利要求1所述的cDNA序列的构建方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：

(1)设计PCR引物，使D-LDH的下游引物和FDH的上游引物具有一段重叠互补区域；

(2)分别通过PCR反应扩增两个基因；

(3)利用overlap extension PCR技术，将两个基因片段拼接起来，同时在两个基因之间添加柔性的连接肽序列。

5.权利要求4所述的方法，其特征在于：所述的PCR引物序列如下：

D-LDH引物：

上游引物：

下游引物：5’-GTC AAA CTT AAC TTG TGTG-3’(SEQ ID No.6)；

FDH引物：

上游引物：5’-CAC ACA AGT TAA GTT TGA CGG CGG TGG CGG CAG CGG CGG AGG CGGAAG CGG AGG CGG AGG AAG CAT GAA GAT CGT TTT AGTC-3’(SEQ ID No.7)；

下游引物：5’-AAC TGC AGT TAT TTC TTA TCG TGT TTA CCG-3’(SEQ ID No.8)。

6.一种载体，包含权利要求1所述的cDNA序列。

7.一种宿主细胞，含有权利要求6所述的载体。

8.一种权利要求1所述的cDNA序列的表达方法，包括用权利要求6所述的载体，转化权利要求7所述的宿主细胞，诱导表达得融合蛋白。