[发明专利]一种中空开放明胶细胞微载体及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种中空开放明胶细胞微载体的制备方法，其特征在于，首先以明胶和蜂蜡为原料，使用双乳法制备明胶蜂蜡微球，再在乙醇/水溶液中重塑，然后在戊二醛/乙醇溶液中交联，最后挤出明胶微球内部的蜂蜡小球，得到中空开放明胶细胞微载体。

2. 根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1.双乳法制备明胶蜂蜡微球

S11.明胶水溶液加热至70～80℃，加入蜂蜡，搅拌5～10min，得到蜂蜡/明胶乳液；

S12.将蜂蜡/明胶乳液倒入60℃预热好的食用油中，搅拌、乳化10～15min；然后倒入-20～4℃预冷的冰乙醇中，静置；

S13.二氧六环/丙酮溶液反复清洗，干燥，得到明胶蜂蜡微球；

S2.把明胶蜂蜡微球依次放进乙醇溶液、戊二醛溶液中进行重塑和交联；

S3.最后对明胶蜂蜡微球进行挤压，去掉球内的蜂蜡，即得中空开放明胶细胞微载体。

3. 根据权利要求2所述制备方法，其特征在于，步骤如下：

S1.双乳法制备明胶蜂蜡微球

S11.配制1%（w/v）明胶水溶液，加热至70～80℃，在400～700rpm的搅拌下，加入蜂蜡，搅拌3～15分钟；明胶与蜂蜡的用量比为1：1～5；

S12.将S11所得乳液倒入60℃预热的食用油中，在200～600转/分的转速下乳化5～30分钟；

S13.将S12所得混合液倒入-20℃预冷的冰乙醇中，静置15～30分钟；

S14.用二氧六环/丙酮溶液反复清洗，干燥，得到明胶蜂蜡微球；

S2.重塑：将S1所得明胶蜂蜡微球置于70～85%乙醇/水溶液中， 70℃重塑3～8分钟，干燥得到重塑后的明胶蜂蜡微球；

S3.戊二醛交联：将重塑后的明胶蜂蜡微球放置在戊二醛/乙醇溶液中，4℃交联10～24h，乙醇反复清洗，真空干燥得到交联后明胶蜂蜡微球；

S4.挤压去蜡：用力挤压交联后明胶蜂蜡微球，所有微球均被挤破后，浸泡在正己烷溶液中，过夜，乙醇清洗多次，干燥即得中空开放明胶微载体。

4. 根据权利要求3所述制备方法，其特征在于，步骤S2具体如下：

S21.取明胶蜂蜡微球置于细胞培养板中，细胞培养板在平面上轻轻敲打，使微球颗粒紧密堆积，表面平整；

S22.将85%的乙醇溶液注射入微球中，明胶蜂蜡微球和乙醇的用量比为1g/mL；

S23.将细胞培养板移至70℃烘干5～8min，取出细胞培养板，以滤纸轻压明胶蜂蜡微粒表面，使粒子之间紧密粘连，并吸走多余的乙醇溶液；

S24.把细胞培养板放置在-20℃冷冻20min后取出，并真空干燥，得到重塑后的明胶蜂蜡微球。

5. 根据权利要求3所述制备方法，其特征在于，步骤S3所述戊二醛/乙醇溶液中戊二醛：乙醇=5：95。

6. 根据权利要求3所述制备方法，其特征在于，步骤S4具体是将交联后明胶蜂蜡微球均匀铺张在锡箔纸或滤纸上，用研磨棒均匀用力挤压，观察所有微球均被挤破后，放置于正己烷溶液中浸泡过夜，无水乙醇清洗三次，干燥即得中空开放明胶微载体。

7. 根据权利要求3所述制备方法，其特征在于，S12所述食用油的用量按照水油相比为1：5进行。

8. 根据权利要求3所述制备方法，其特征在于，S12所述食用油为花生油。

9. 根据权利要求1～8任一所述制备方法制备得到的中空开放明胶细胞微载体。

10. 权利要求9所述中空开放明胶细胞微载体在细胞培养中的应用或在制备组织工程中骨缺损的填充修复材料方面的应用。