[发明专利]人胰岛素类似物及其酰化衍生物

权利要求书

1.一种人胰岛素类似物或其生理耐受盐，其具有下式A链和B链序列及结构：

其中，

A₀可以是R，也可以缺失；A₂₁可以是N或G；

B₃是K；

B₂₇可以是E、T、D、或K；

B₂₈可以是E、D、P或K；

B₂₉是E；B₃₀是E；

B₃₁、B₃₂可以是R或者单个缺失或两者缺失；

当B3、B27-B29是赖氨酸残基时，其ε-氨基可以是被酰化修饰的；

可选地，A及B链N-末端的α-氨基也是被酰化修饰的。

2.如权利要求1所述的人胰岛素类似物或其生理耐受盐，其特征在于，A₀缺失。

3.如权利要求1所述的人胰岛素类似物或其生理耐受盐，其特征在于，所述的A链和B链序列选自如下所述的序列组合：

A链：GIVEQCCTSICSLYQLENYCN              SEQ ID NO.1

B链：FVKQHLCGSHLVEALYLVCGERGFFYTPEE     SEQ ID NO.9

A链：GIVEQCCTSICSLYQLENYCG              SEQ ID NO.2

B链：FVKQHLCGSHLVEALYLVCGERGFFYTPEE     SEQ ID NO.16。

4.如权利要求1所述的人胰岛素类似物或其生理耐受盐，其特征在于，所述的人胰岛素类似物被PEG化。

5.如权利要求4所述的人胰岛素类似物或其生理耐受盐，其特征在于所述的人胰岛素类似物被PEG所修饰；所述的PEG分子的分子量为5-100KD；所述的PEG分子为支链型或直链型。

6.如权利要求4所述的人胰岛素类似物或其生理耐受盐，其特征在于所述的PEG分子的分子量为10-80KD。

7.如权利要求4所述的人胰岛素类似物或其生理耐受盐，其特征在于所述的PEG分子的分子量为15-45KD。

8.如权利要求4所述的人胰岛素类似物或其生理耐受盐，其特征在于所述的PEG分子的分子量为20-40KD。

9.一种如权利要求1至8任一项所述的人胰岛素类似物或其生理耐受盐的制备方法，包括构建表达载体，转化至宿主细胞中的表达，分离纯化表达前体产物，用化学或/和酶方法从表达前体产物中释放所述的胰岛素类似物；任选人胰岛素类似物被PEG化。

10.一种如权利要求9所述的人胰岛素类似物或其生理耐受盐的制备方法，所述的PEG化化学酰化修饰方法，包括酰化试剂的合成，人胰岛素类似物中氨基的酰化和酰化集团中保护基的脱除。

11.一种用于制备如权利要求1所述的人胰岛素类似物或其生理耐受盐的表达前体产物，其结构通式(I)为：

A-R1-B(I)

其中：

R1为0-5个氨基酸残基肽段，该氨基酸残基肽段由丙氨酸(A)、赖氨酸(K)、精氨酸(R)组成；

A、B分别为所述胰岛素类似物对应的A链和B链。

12.如权利要求11所述的表达前体产物，其特征在于，所述的表达前体产物选自：

SEQ ID NO.20：

FVKQHLCGSHLVEALYLVCGERGFFYTPEEKRGIVEQCCTSICSLYQLENYCG，SEQ ID NO.21：

FVKQHLCGSHLVEALYLVCGERGFFYTPEEKRGIVEQCCTSICSLYQLENYCN。

13.一种编码如权利要求11或12所述的表达前体产物的DNA序列。

14.一种含有如权利要求13所述的DNA序列的表达载体。

15.一种用如权利要求14所述的表达载体转化的宿主细胞。

16.如权利要求15所述的宿主细胞，其特征在于，所述的宿主细胞为细菌。