[发明专利]超声前体的制备方法

说明书

发明领域

本发明涉及制备包含磷脂稳定的全氟丁烷微泡的超声造影剂前体的方法。所述方法顺从工业规模生产，并且提供所述微泡的更一致的瓶与瓶产率(vial-to-vial yield)和尺寸分布。还提供使用本发明的方法制备试剂盒和超声造影剂的方法。

背景技术

基于全氟化碳(例如，全氟丙烷或全氟丁烷)的磷脂稳定的微泡的超声造影剂在本领域中熟知[参见，例如Wheatley等，J. Drug Del. Sci. Technol., 23(1), 57-72 (2013)]。

WO 97/29782教导了在室温下稳定的超声造影剂前体可通过在选自蔗糖、麦芽糖、海藻糖、棉子糖或水苏糖(优选蔗糖)的冷冻-干燥稳定剂存在下冻干全氟化碳微泡来制备。

WO 99/03558公开了选择超声造影气体微泡形成多分散混合物以获得具有紧凑尺寸分布(即，单分散性)的这类微泡的方法。所述方法包括浮选和再悬浮。

WO 99/08715公开了制备包含含气体囊泡的水性分散体的药物组合物的方法，所述囊泡的膜包含两亲性成膜材料，所述方法包括：

(i) 由包含两亲性成膜材料的混合物产生含气体囊泡的液体分散体；

(ii) 冻干所述含气体囊泡的液体分散体；

(iii) 用无菌水性液体重构步骤(ii)的冻干产物以生成含气体囊泡的水性分散体；和

(iv) 处理步骤(i)或步骤(iii)的水性分散体产物或步骤(ii)的冻干产物以生成含气体囊泡的基本无聚集物的无菌水性分散体。

WO 99/08715教导了在步骤(i)和步骤(ii)之间的时间应该减至最少，以抑制微泡团聚形成不想要的较大物质。然而，WO 99/08715没有教导在冻干之前应该对含气体囊泡进行尺寸控制，以及在冻干步骤或在批量生产过程中分配到多个单个小瓶中之前必须使用防冻剂/冻干保护剂。

EP 1228770 A1教导了制备包含气体微泡的冻干的超声造影剂的方法，其中冻干的前体的小瓶在减小的顶空气体压力下密封。据说该减压有助于控制在重构前体小瓶后形成的水性微泡组合物中的粒度。

WO 2004/069284解决了得到具有限定尺寸分布的磷脂稳定的气体微泡超声造影剂的问题。WO 2004/069284教导了在冻干之前在微泡制备乳液中应该使用与水基本不混溶的有机溶剂。WO 2004/069284教导了在重构冻干的前体后得到的微泡具有相对较小的直径和窄尺寸分布。

Solis等[Int.J.Pharmaceut.,396(1-2), 30-38 (2010)]研究了赋形剂(包括冻干保护剂)对冻干的全氟丙烷微泡前体的影响。他们得到的结论是，葡萄糖是最好的冻干保护剂，紧接着是海藻糖，这两者均优于蔗糖或甘露糖醇。

Feshitan等[J.Coll.Interf.Sci.,329, 316-324 (2009)]报道，与表面活性剂涂覆的微泡形成对比，脂质涂覆的微泡在离心之后稳定，并且脂质壳粘性高且相对不透气。Feshitan等报道在4-5μm尺寸范围内的全氟丁烷微泡稳定至少2天，但在2周后趋于崩解成较小尺寸的微泡(1-2μm)。

仍然需要能够控制造影剂的微泡浓度和尺寸分布、产率和其它重要特性的瓶与瓶变化的超声冻干前体制备方法。所述方法需要顺从工业规模生产，并获得具有满足规章要求(例如，美国药典和国际协调会议指南(ICH Guidelines))的小瓶含量和安全性特性的均一性的前体产物。

发明内容

发明概述

例如超声处理和高剪切乳化的常规微泡超声造影剂制备方法提供良好的产率和低成本生产。当容量规模扩大到工业生产时，它们具有难以控制微泡的尺寸分布的缺点。虽然已经开发了容许制备具有紧凑尺寸分布的这类微泡的其它制备技术，但这些备选方法的产率较低，涉及高成本设备或太慢而无法扩大规模到工业生产方法。

本发明寻求提供顺从工业规模生产、但对造影剂的微泡浓度、尺寸分布、产率和其它重要特性的瓶与瓶变化也给予足够控制的方法。

本发明人发现，在上千个微泡造影剂小瓶的批量生产中，两个关键参数对于控制变化性是重要的：(a) 在冻干之前的微泡的尺寸范围；和(b) 在分配到指定小瓶与将小瓶内含物在-40℃至-70℃下冷冻之间经过的时间(“停留时间(holding time)”)。

本发明提供了控制这两参数的方法，随之而来的优势是：

(i) 在每个小瓶中最佳微泡产率和浓度；

(ii) 对瓶与瓶含量的均一性的控制。