[发明专利]一种测定菜籽油共轭亚油酸含量的方法

说明书

技术领域

本发明是一种测定菜籽油共轭亚油酸(CLA)含量的方法，利用紫外分光光度测定方法，重点对于经过酯化处理后的菜籽油进行吸光度测定，来换算菜籽油中共轭亚油酸的含量，属于食品分析领域。

背景技术

共轭亚油酸是一系列碳原子数为18，含有共轭双键(-C＝C-C＝C-)的必需脂肪酸亚油酸的多种几何与位置异构体混合物的总称，共轭亚油酸的双键在碳链上有多种位置排列方式，共轭双键起始于羧基端的第8,9,10,11位碳原子，由于共轭双键两端的碳原子都具有顺式和反式两种几何构型，每种位置异构又具有4种几何异构体，故共轭亚油酸的种类十分丰富，一般认为共轭亚油酸总共有16种同分异构体。

共轭亚油酸是人和动物不可缺少的脂肪酸之一，却是自身无法合成的一种具有显著药理作用和营养价值的物质，对人体健康有很大益处。大量文献证明，共轭亚油酸具有抗肿瘤、抗氧化、抗突变、抗菌，降低人体胆固醇，抗动脉粥样硬化，提高免疫力，提高骨骼密度，防治糖尿病及促进生长等多种重要生理功能。近年来又有一些临床研究报告证明，共轭亚油酸进入机体后能够增加体能消耗，因此在体重控制方面可以有效降低体内脂肪沉积。对共轭亚油酸安全性毒理学试验研究表明，它是一种既无毒又无任何副作用的物质，被誉为“21世纪绿色营养保健食品”。目前，共轭亚油酸已成为食品、药品、化妆品等行业的研究热点。

共轭亚油酸在自然界中含量较少，主要存在于反刍动物牛、羊等的肉和奶及其制品中，非反刍动物及其它食品中含量较少。

为了充分发挥共轭亚油酸的特异性功能，人工合成法是获得大量共轭亚油酸的有效途径。在实际生产中，通常利用亚油酸或富含亚油酸的植物油为底物，如大豆油、蓖麻油、核桃油、红花油、葵花籽油、玉米胚芽油、花生油、瓜子油等，通过化学合成、微生物发酵及酶异构法等将亚油酸转化成共轭亚油酸。

随着科学技术的不断发展，各种分析方法不断涌现，如气相色谱、高效液相色谱法、电喷雾电离质谱均能有效地对共轭亚油酸含量进行分析。虽然上述方法分析准确、精度高，但是对样品的前期处理要求苛刻，同时由于设备价格昂贵， 对设施使用环境要求高，同时需要配备专业技术人员按照操作流程严格操作，所需耗材成本高，不适应工厂对大批量产品进行分析检验。本发明利用紫外分光光度仪能对酯化后菜籽油中共轭亚油酸含量进行有效分析测定，其测试结果稳定、重现性好，操作方法简便快捷，所用耗材成本低廉，适合于中小规模生产企业样品的批量分析。

发明内容

本发明的目的是提供一种测定菜籽油共轭亚油酸含量的方法。该方法可以简便快速检测菜籽油中共轭亚油酸的含量。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

(一)建立标准曲线

(1)共轭亚油酸甲酯化

量取三氟化硼甲醇溶液8-15mL于250mL烧瓶中，称取1g待测样品加入其中，连接回流冷凝装置，水浴加热，在60-70℃条件下先回流时间1-8分钟，加入羟甲基胺乙二醇继续回流2-3小时；将烧瓶从回流装置中取出，冷却至22-25℃，加入26％质量浓度的NaCl溶液，在转速为180-260转/分钟、温度为25-37℃的振荡培养箱中，反应2-6min；将上述溶液移入分液漏斗中，静置2小时后，将上层溶液移至另一烧瓶中，用羟甲基胺乙二醇进一步萃取1-3次，羟甲基胺乙二醇的加入量为上层液体的1-1.5倍体积；合并萃取液，并在萃取液中加入无水Na₂SO₄试剂，其加入量为每毫升萃取液加入0.5g，将萃取液中残留的水分全部除去，过滤后备用。

(2)测定共轭亚油酸甲酯吸光值

发明方法中通过测定共轭亚油酸甲酯的含量，对样品中共轭亚油酸的含量进行辅助矫正，使用分析天平精确称取样品0.0579g置于100mL容量瓶中，用羟甲基胺乙二醇定容至刻度，分别稀释以下6个浓度梯度0.01g/L、0.02g/L、0.03g/L、0.04g/L、0.05g/L、0.06g/L作为待测样品；将UV760CRT型紫外可见分光光度计的波长分别设定在190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300nm范围，测定不同浓度梯度下样品吸光值，通过绘图计算得出样品的最大吸光值对应的波长，并在此波长下测定待测批量样品的吸光度(A)。

(3)建立回归方程