[发明专利]从辣木叶中提取蛋白质和超氧化物歧化酶（SOD）的工艺

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及到一种从辣木叶中提取蛋白质和超氧化物歧化酶(SOD)的工艺。

背景技术

辣木为多年生木本植物，原产于印度北部喜马拉雅山地区，是一种具有很高食用和药用价值的热带植物。大量研究证明，辣木叶含有丰富的蛋白质、总黄酮以及超氧化物歧化酶(SOD)等多种功效成分。辣木叶的蛋白质含量高达27%，约为牛奶的2倍；辣木叶所含的超氧化物歧化酶(SOD)具有清除自由基、调节甲状腺素和肝脂过氧化作用。近年来，辣木在我国广东、云南和海南等地都广为引种栽培，其相关产品的开发成为热点。但是，国内对于辣木的研究主要集中在栽培技术和营养成分分析方面，至今未见有关从辣木叶中提取蛋白质和超氧化物歧化酶(SOD)工艺的专利报道。

在现有的其他植物叶蛋白的提取工艺中，一般采用加热处理来提取分离叶蛋白，这种方法既消耗大量能源，又很容易造成被提取的叶蛋白变性，复水溶解性差，消化率不高，商业应用价值低。因此，研制开发一种从植物叶中提取蛋白质和超氧化物歧化酶(SOD)的新工艺具有重要意义。

发明内容

本发明的目的正是基于上述状况而提出的一种从辣木叶中提取蛋白质和超氧化物歧化酶(SOD)的工艺，该工艺以丰富的辣木鲜嫩叶为原料，工艺简单，安全可靠，易于实施，所提取的蛋白质和超氧化物歧化酶(SOD)可作为有关食品和医药工业的新原料，具有较高的实用价值。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案来实现的：从辣木叶中提取蛋白质和超氧化物歧化酶(SOD)的工艺，其工艺步骤如下：

（1）取新鲜辣木叶经过除杂清洗，加入辣木鲜叶重量2～8倍的缓冲液，粉碎打浆，在常温下不断搅拌，浸提1～4小时，压榨过滤，收集滤液；

（2）将步骤（1）所得滤液进行高速离心分离，收集上清液（Ⅰ）；

（3）取步骤（2）所得上清液（Ⅰ），调整其PH值至4.9～5.2，于0～4℃下静置30～40分钟后，高速离心，分别收集沉淀物（Ⅰ）和上清液（Ⅱ）；

（4）将步骤（3）所得沉淀物（Ⅰ）加入去离子水搅拌溶解，得超氧化物歧化酶（SOD）粗品溶液，将SOD粗品溶液加热升温至42℃，用2N NaOH溶液调整PH值至9.0，并滴加SOD粗品溶液总质量0.01%～0.05%的修饰保护剂，保温反应1小时后，快速冷却至30℃以下，离心，收集上清液，用1N HCl调整PH值至6.5～7.0，快速升温至60～70℃，不断搅拌，保温处理10分钟后，快速冷却至30℃以下，离心，收集上清液即SOD精品溶液；

（5）取步骤（4）所得SOD精品溶液，边搅拌边缓慢加入SOD精品溶液体积1.2～1.8 倍的预冷过的95%乙醇，于0～4℃下静置10～15分钟后，离心，收集沉淀物，再用去离子水溶解，离心，收集上清液，冷冻干燥，即得超氧化物歧化酶（SOD）精品冻干粉；

（6）取步骤（3）所得上清液（Ⅱ），用1N HCl溶液调整PH值至4.0～4.3，于0～4℃下静置30～40分钟后，高速离心，收集沉淀物（Ⅱ），用缓冲液溶解，喷雾干燥，即得辣木叶蛋白粉。

上述步骤（1）中的缓冲液为PH值6.5～7.6、浓度为20mmol/L～200mmol/L、含5 mol/L EDTA和20mmol/L焦亚硫酸钠的磷酸氢二钠-磷酸二氢钾（Na₂HP0₄-KH₂P0₄) 缓冲液。

上述步骤（2）中的高速离心分离技术是采用连续离心机离心，转速大于15000r/min，离心20～40min。

上述步骤（3）中的高速离心分离技术是采用连续离心机离心，转速大于15000r/min，离心20～40min。

上述步骤（4）中的修饰保护剂是月桂酰氯。

上述步骤（6）中的高速离心分离技术是采用连续离心机离心，转速大于15000r/min，离心20～40min；缓冲液为PH值6.5～7.6、浓度为20mmol/L～200mmol/L、含5 mol/L EDTA和20mmol/L焦亚硫酸钠的磷酸氢二钠-磷酸二氢钾（Na₂HP0₄-KH₂P0₄) 缓冲液。

本发明的优点在于：