[发明专利]一种鉴别结核分枝杆菌复合群菌种的引物及应用

说明书

技术领域

本发明属于医学检验领域，具体涉及一种鉴别结核分枝杆菌复合群菌种的引物及应用。

背景技术

结核病是最严重的流行性传染疾病之一，使人类的公共健康面临着巨大的挑战，它在全世界范围内有着相当高的致病率和致死率。结核分枝杆菌复合群(MTBC)中的一些菌种是引发人类和动物结核病的病原菌。引起人类结核病的主要病原菌即结核分枝杆菌(M.tuberculosis)起源于大约3百万年前，并因耐药株的出现持续影响着人类健康。除了结核分枝杆菌，在病人体内还发现了MTBC中的其它菌种，包括牛型分枝杆菌(M.bovis)、肯尼迪分枝杆菌(M.canetii)、非洲分枝杆菌(M.africanum subtype I)、山羊分枝杆菌(M.caprae)、田鼠分枝杆菌(M.microti)。其中牛型分枝杆菌是牛结核病的主要病原菌，由于直接与牛接触或食用未消毒的奶制品致使人类的感染。肯尼迪分枝杆菌、非洲分枝杆菌、山羊分枝杆菌、田鼠分枝杆菌均常见于非洲病人体内。

传统的鉴定MTBC菌种的方法是根据菌落形态、氧偏好性、烟酸累积、硝酸盐还原酶的活性以及生长动力学等的表型特征来判断，这些方法都制约于缓慢的细菌培养，而且涉及主观解读易于判错。传统的鉴定方法由于时间长等原因已不能满足当前的临床需要，因此快速鉴定MTBC中的成员，对于控制传染源和早期治疗起着至关重要的作用，也可为临床治疗提供用药指导。

现今的分子鉴别方法主要有IS6110-RFLP，MIRU-VNTR、Spoligotyping和SNP。IS6110-RFLP应用广泛，分辨率较高，但该方法基于大量菌株的培养，价格高，时间长且IS6110拷贝数较少的菌株不易分型；MIRU-VNTR不需要大量培养菌株，结果容易读识，但由于位点组合不同，其分辨率和成簇率亦不尽相同；Spoligotyping分型方法用时较短，成本较低，但分辨率较低，图片结果易产生假阳性；SNP需要测序，价格昂贵，不能在实验室间推广。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种鉴别结核分枝杆菌复合群菌种的成套引物。

本发明提供的鉴别结核分枝杆菌复合群菌种的成套引物，由引物对(1)-(7)组成：

(1)为由SEQ ID No.1所示的单链DNA和SEQ ID No.2所示的单链DNA组成的引物对1；

(2)为由SEQ ID No.3所示的单链DNA和SEQ ID No.4所示的单链DNA组成的引物对2；

(3)为由SEQ ID No.5所示的单链DNA和SEQ ID No.6所示的单链DNA组成的引物对3；

(4)为由SEQ ID No.7所示的单链DNA和SEQ ID No.8所示的单链DNA组成的引物对4；

(5)为由SEQ ID No.9所示所示的单链DNA和SEQ ID No.10所示的单链DNA组成的引物对5；

(6)为由SEQ ID No.11所示的单链DNA和SEQ ID No.12所示的单链DNA组成的引物对6；

(7)为由SEQ ID No.13所示的单链DNA和SEQ ID No.14所示的单链DNA组成的引物对7。

本发明的另一个目的是提供一种鉴别结核分枝杆菌复合群菌种的PCR试剂组。

本发明提供的鉴别结核分枝杆菌复合群菌种的PCR试剂组由PCR试剂1、PCR试剂2、PCR试剂3、PCR试剂4、PCR试剂5、PCR试剂6和PCR试剂7组成。

上述PCR试剂组中，所述PCR试剂1包括上述成套引物中的引物对1；所述PCR试剂2包括上述成套引物中的引物对2；所述PCR试剂3包括上述成套引物中的引物对3；所述PCR试剂4包括上述成套引物中的引物对4；所述PCR试剂5包括上述成套引物中的引物对5；所述PCR试剂6包括上述成套引物中的引物对6；所述PCR试剂7包括上述成套引物中的引物对7。

上述PCR试剂组中，所述引物对1、引物对2、引物对3、引物对4、引物对5、引物对6或引物对7中的各条引物的物质的量相同。

上述成套引物中各个引物对独立包装，各条引物独立包装。

本发明还有一个目的是提供一种用于鉴别结核分枝杆菌复合群菌种的试剂盒。

本发明提供的用于鉴别结核分枝杆菌复合群菌种的试剂盒，其含有上述的成套引物或含有上述的PCR试剂组。