[发明专利]一种提取抗氧化性多肽的方法

权利要求书

1.一种提取抗氧化性多肽的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）、取发酵肉制品的瘦肉，去除其中的肌腱和肌膜，切碎斩匀为细碎颗粒状肉粒，称量1份所述肉粒，投入到浸提液中，匀浆后得匀浆液；

2）、将所述匀浆液静置后进行第一次离心处理，然后过滤，得澄清上清液，往上清液中加入沉淀液，静置后进行第二次离心处理，得到二次上清液；

3）、将所述二次上清液过滤，旋转蒸发器浓缩，经冷冻干燥后得粗肽粉；

4）、对所述粗肽粉进行分离纯化，制得粉末态抗氧化活性肽。

2.根据权利要求1 所述的一种提取抗氧化性多肽的方法，其特征在于，所述步骤1）中匀浆条件为：20000-24000r/min^-，匀浆2-5次，每次8-15s，中间间歇8-15s。

3.根据权利要求1 所述的一种提取抗氧化性多肽的方法，其特征在于，所述步骤1）中浸提液为磷酸盐缓冲液或盐酸溶液，磷酸盐缓冲液浓度为0.02mol/L^-，盐酸溶液浓度为0.01 mol/L；所述浸提液的体积量为肉粒的3-4倍。

4.根据权利要求1 所述的一种提取抗氧化性多肽的方法，其特征在于，所述步骤2）中第一次离心处理条件为：所述匀浆液在4℃环境中静置15-25分钟后保持4℃离心，所述第二次离心处理条件为：静置时间为10-15小时。

5.根据权利要求1 所述的一种提取抗氧化性多肽的方法，其特征在于，所述步骤2）中沉淀液为乙醇溶液或三氟乙酸溶液，乙醇溶液浓度为40%，三氟乙酸溶液浓度为0.1%，所述沉淀液的体积量为上清液的3-4倍。

6.根据权利要求1 所述的一种提取抗氧化性多肽的方法，其特征在于，所述步骤3）中过滤采用0.45 μm滤膜过滤。

7.根据权利要求1 所述的一种提取抗氧化性多肽的方法，其特征在于，所述步骤4）中分离纯化依次采用凝胶层析法、阴离子交换柱层析法和反相高效液相色谱法。

8.根据权利要求7所述的一种提取抗氧化性多肽的方法，其特征在于，所述凝胶层析法用超纯水平衡凝胶层析柱，填料为葡聚糖凝胶树脂SephadexG-25，上样量为2mL,洗脱速度为2mL/min,检测波长为280nm。

9.根据权利要求7所述的一种提取抗氧化性多肽的方法，其特征在于，所述阴离子交换柱层析用磷酸盐缓冲液,平衡层析柱，所述磷酸盐缓冲液浓度为0.02mol/L，pH值为8.0，填料为阴离子交换树脂，上样量为5mL，以A液：磷酸盐缓冲液, B液：NaCl-磷酸盐缓冲液洗脱，所述NaCl-磷酸盐缓冲液浓度为1mol/mL，洗脱速度为2mL/min，检测波长为280nm ，0-100%B梯度洗脱。

10.根据权利要求7所述的一种提取抗氧化性多肽的方法，其特征在于，所述反相高效液相色谱法用A：乙腈和B：甲酸0.1%作为洗脱液，流速0.3mL/min，上样量为0.5mL，检测波长为280nm。