[发明专利]一种诱导制备胸苷磷酸化酶的方法及应用

权利要求书

1.一种诱导胸苷磷酸化酶的方法，包括：将具有胸苷磷酸化酶的微生物在固体培养基上培养，再接入液体培养基摇瓶培养，即得，其特征是：固体培养基中加入了诱导物，所述诱导物是胸苷类的嘧啶核苷。

2.权利要求1的方法，其中诱导物为β-胸苷或双脱氧胸苷。

3.权利要求1的方法，其中诱导物在固体培养基中浓度为5-80mmol/L。

4.权利要求1的方法，包括：将具有胸苷磷酸化酶的乙酰短杆菌菌种接入加入了胸苷类的嘧啶核苷作为诱导物的固体培养基中，28-36℃培养20-28h，诱导提高其TPase活性，然后将提高了TPase活性的菌接入液体培养基中28-36℃、150-250rpm，培养20-28h，离心后获得菌体用pH7.0的磷酸缓冲液洗涤，即得。

5.权利要求4的方法，包括：将具有胸苷磷酸化酶的大肠杆菌菌种接入加入了胸苷类的嘧啶核苷作为诱导物的固体培养基中，32℃培养24h，诱导提高其TPase活性，然后将提高了TPase活性的菌接入液体培养基中28-36℃、150-250rpm、培养20-28h，离心后获得菌体用pH7.0的磷酸缓冲液洗涤，即得。

6.权利要求1至4中任一项的方法，其中固体培养基每100ml含牛肉膏1.0克、蛋白胨1.0克、酵母浸粉0.5克、氯化钠0.5克和琼脂粉2.0克，pH至7.0；液体培养基每100ml含酵母浸膏4.0克、葡萄糖0.4克和氯化钠0.3，pH为7.0。

7.权利要求1的方法，其中胸苷磷酸化酶来源于乙酰短杆菌或大肠杆菌。

8.一种制备2'-脱氧腺苷的方法，包括：先将乙酰短杆菌菌体用权利要求1的方法诱导，诱导后的菌体再与β-胸苷和腺嘌呤在磷酸缓冲溶液中反应，即得。

9.一种制备阿糖腺苷的方法，包括：先将乙酰短杆菌菌体用权利要求1的方法诱导，诱导后的菌体再与阿糖尿苷和腺嘌呤在磷酸缓冲溶液中反应，即得。

10.一种制备2'-脱氧氟尿苷的方法，包括：先将乙酰短杆菌菌体用权利要求1的方法诱导，诱导后的菌体再与β-胸苷和5-氟尿嘧啶在磷酸缓冲液中反应，即得。