[发明专利]蜈蚣蛆虫蛋白质的制备方法及其在制备抗甲状腺癌药品中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种药物的制备方法及其新用途，尤其是蜈蚣蛆虫蛋白质的制备方法及其在制备抗甲状腺癌药品中的应用。

背景技术

甲状腺癌是发生于甲状腺体的恶性肿瘤。甲状腺癌发生的原因一般为放射性损伤、碘的缺乏或过量引起的甲状腺结构和功能的变化，或者某些甲状腺病变以及家族遗传因素。

现代分子生物学研究表明，甲状腺癌与多种病毒、多种癌基因、癌基因转移有一定的关联性。

现在对甲状腺癌治疗常用外科手术治疗、放射治疗、化学药物治疗。中医治疗则对症分别采用清热解毒、散结消瘿、理气化痰、散瘀破结等方法治疗。

CN103122390A公开了FRAT1基因作为检测甲状腺癌的血清标志物及其应用，该发明涉及FRAT1基因的甲基化作为检测甲状腺癌的标志物，将OXTR基因与FRAT1基因联用能更好的作为检测甲状腺癌的标志物。

CN102319234A公开了姜黄素在制备甲状腺癌治疗剂中的应用，姜黄素特异性杀伤甲状腺癌细胞，但对正常甲状腺细胞影响较小，能促进甲状腺癌细胞的凋亡。

CN103038636公开了用于诊断病状的方法和组合物，该发明涉及用于诊断甲状腺癌和其他癌症的分子谱分析的组合物、试剂盒和方法。

CN101068933A公开了用于肿瘤细胞增生转导的纤维修饰的腺病毒载体。该发明提供一种有效传到原发肿瘤细胞的腺病毒载体，该载体包括嵌合腺病毒纤维蛋白直，其中包括亚型C腺病毒纤维轴的一部分及头区结合CD46的亚型B腺病毒或者血清型37腺病毒头的一部分。

CN103866039A公开了人类甲状腺癌组织基因特异位点甲基化水平检测引物及应用，该发明涉及人类甲状腺癌组织基因。所述检测物的序列包括上游扩增引物序列、生物素修饰下游扩增引物序列、焦磷酸测序引物序列。

中药蜈蚣为蜈蚣科动物少棘蜈蚣和多棘蜈蚣的虫体，性温，味辛，有毒，归肝经。

蜈蚣全虫含两种类似蜂毒的有毒成分，即组胺样物质及溶血性蛋白质。

201210178608.4公开了人工培殖蜈蚣蛆虫的工艺，该发明以蜈蚣等原料作为培养基，经过培殖、培养、加工成为具有生物活性的虫体。该过程经过基因重组消除了有毒成分，制备成为抗甲状腺癌的药物原料。

发明内容

本发明的目的是提供一种蜈蚣蛆虫蛋白质的制备方法及其在制备抗甲状腺癌药品中的应用，利用蜈蚣蛆虫为原料，经过分离纯化蛋白质，再用此蛋白质制备各种剂型的药品，本过程工艺简要明了，药品成分明确，一致性好，疗效明显。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

（1）将1000g蜈蚣蛆虫在常温膨化装置（200520108339.X）中常温条件下膨化粉碎。

本步骤中，所述膨化压力为0.1~5MPa，时间为10~60min。

（2）膨化粉碎后的物料加入到膨胀溶剂体系提取装置（201210179076.6）中，加入膨胀溶剂并加压至2~10MPa，形成膨胀溶剂体系，提取出蜈蚣蛆虫蛋白质粗品。

本步骤中，所述膨胀溶剂由1~10Kg液态二氧化碳、100~500mL甲醇及100~300gNH₃·H₂O组成或由1~10Kg液态二氧化碳、100~500mL乙醇及100~300g氯化铵组成。

本步骤中，所述提取温度为10~20℃，时间为10~30min。

（3）收集含有蜈蚣蛆虫蛋白质粗品的溶液并且用微孔过滤器过滤去掉杂质。

本步骤中，所述微孔过滤器的孔径为0.5~50μm。

（4）用超滤机超滤处理，收集含有相应分子量的蜈蚣蛆虫蛋白质超滤溶液。

本步骤中，所述超滤机的孔径为50~100nm。

（5）超滤液溶解在适宜的溶剂中用固相萃取柱分离，收集洗脱成分。

本步骤中，所述溶剂为乙腈。

（6）将洗脱成分溶解在合适的溶剂体系中，用超声驻波液相制备色谱（200920274485.8）分离纯化。

本步骤中，所述溶剂体系由正丁醇-乙酸乙酯-水（体积比1.25:3.75:5）组成或4.5%聚乙二醇-7%葡聚糖T500（重量比）组成。

（7）纯化后的蜈蚣蛆虫蛋白质用真空冷冻干燥机制备成冻干蛋白粉。

本步骤中，所述真空冷冻干燥温度为-30~50℃、时间为18~26h。

（8）赋予不同的药用辅助材料，分别制备成注射剂、口服剂等，可用于制备抗甲状腺癌药品。