[发明专利]一种鉴定梅山猪或其肉制品的专用引物、方法和试剂盒有效
申请号: | 201510088708.1 | 申请日: | 2015-02-26 |
公开(公告)号: | CN104593519A | 公开(公告)日: | 2015-05-06 |
发明(设计)人: | 史子学;马志永;张国平;朱建忠;王勃;陈建生;陆林根;卫金良;唐赛涌;费琼慧 | 申请(专利权)人: | 中国农业科学院上海兽医研究所;上海市嘉定区农业委员会;上海市嘉定区梅山猪育种中心 |
主分类号: | C12Q1/68 | 分类号: | C12Q1/68;C12N15/11 |
代理公司: | 上海弼兴律师事务所 31283 | 代理人: | 薛琦;沈利 |
地址: | 200241 *** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 鉴定 山猪 肉制品 专用 引物 方法 试剂盒 | ||
1.一种鉴定梅山猪或其肉制品的专用引物,其特征在于,所述专用引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.一种鉴定梅山猪或其肉制品的方法,其特征在于,所述的方法包括以下的步骤:
1)、提取生鲜肉和/或肉制品的基因组DNA;
2)、以步骤1)所述的基因组DNA为模板,利用核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的引物,进行PCR反应。
3.如权利要求2所述的方法,其特征在于,所述的方法还包括以下的步骤:
3)、构建步骤2)所述的PCR反应的扩增片段的电泳图谱;或
4)、根据步骤3)所述的电泳图谱,鉴定梅山猪的生鲜肉和/或肉制品。
4.如权利要求2所述的方法,其特征在于,步骤1)中所述提取基因组DNA的方法为利用SDS提取缓冲液提取。
5.如权利要求2所述的方法,其特征在于,步骤2)中所述PCR反应的反应体系为模板DNA 2ng/μL、引物0.4μmol/L、2×Taq PCR Master Mix12.5μL、ddH2O补足25μL;和/或,所述PCR反应的反应程序为95℃预变性2min,95℃变性30s,54.6℃退火30s,72℃延伸1min,循环40次,72℃再延伸10min。
6.如权利要求2所述的方法,其特征在于,步骤3)中所述的电泳图谱为利用1.0%的琼脂糖凝胶和1×TAE缓冲液为介质获得的电泳图谱,所述百分比为质量百分比。
7.如权利要求2所述的方法,其特征在于,步骤4)中所述的鉴定的依据为DNA指纹图谱,所述DNA指纹图谱根据步骤3)所述的电泳图谱构建,梅山猪在所述的DNA指纹图谱中有且仅有2000bp、1000bp、450bp、400bp和350bp的条带。
8.如权利要求2所述的方法,其特征在于,所述的梅山猪为原产于上海市嘉定区、江苏省太仓市和昆山市的中型猪种;所述的肉制品为生鲜肉或冷冻肉。
9.一种梅山猪或其肉制品的分子鉴定试剂盒,其特征在于,所述分子鉴定试剂盒包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的引物。
10.如权利要求9所述的分子鉴定试剂盒,其特征在于,所述基因组分子鉴定试剂盒还包括ISSR-PCR反应混合物、阳性对照和水;所述ISSR-PCR反应混合物包括实行ISSR-PCR反应的Taq DNA聚合酶和PCR缓冲液;较佳地包括2×Taq PCR Master Mix;所述阳性对照为纯种梅山猪基因组DNA;和/或,所述的水为去离子水;较佳地为无菌去离子水。
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