[发明专利]一种用于骨质疏松的诊断的血液检测试剂盒

说明书

本申请要求中国发明专利申请201410050513.3的优先权(申请日：2014年02月14日，发明名称：一种用于骨质疏松的辅助诊断的血液检测试剂盒)。

技术领域

本发明属于分子诊断领域，尤其涉及可用于骨质疏松的诊断的血液检测试剂盒。此外，本发明还涉及用于扩增miR-214的引物在制备可用于骨质疏松的诊断的血液检测试剂盒中的用途。

背景技术

骨质疏松症是指以单位体积内骨量低于正常为特征的骨胳疾病，骨质有机成分生成不足、继发性钙盐减少及骨组织微隙结构破坏是其主要表现。骨质疏松症目前已经成为世界性问题，是继肿瘤、心血管疾病之后又一严重危害人类健康的一种疾病。有研究显示，骨质疏松症其发病率居常见病、多发病的第7位。

骨质疏松发病现状

我国是世界上老年人口数量最多的国家，预测到2050年我国60岁以上的老年人将占全国总人口的20％。随着人口的日益老龄化，老年性疾病，特别是骨质疏松的发病率也在同步增长。目前我国有骨质疏松病人约9000万。到2050年将增至2亿多人，占人口的13.2％，但目前医学上还未有安全而有效的根治方法帮助已疏松的骨胳恢复原状。因此，正确认识、早期预防、早期干预、早期诊断显得尤为重要。

骨质疏松的现行诊断方法

骨质疏松症是一种发病隐匿、常见但又诊断不足的疾病，其早期准确诊治将有助于为更好的防治骨质疏松提供依据。目前骨质疏松的诊断仍沿用1994年WHO颁布的以骨矿含量(BMC)和骨密度(BMD)为基础的骨质疏松诊断标准，即以双能X线吸收法(DEXA)为基本测量方法。BMC或BMD在青年成人平均值的1个标准差(s)以内者为正常；若以T评分(T值)表示，即≥-1.0为正常，-2.5<T值<-1.0为骨量减少，≤-2.5为骨质疏松。但目前集中于-2.5的T评分阈值正在发生改变。利用该标准进行判断时，骨质疏松组和正常组有一定程度上的重叠，该标准有待进一步完善。除此之外，临床上还结合血、尿生化检测、内分泌功能测定、骨形成和骨吸收指标、骨骼X射线、双能X线骨密度吸收法(DEXA)及定量CT(QCT)以及定量超声(QUS)等检测指标，上述检查指标花费高，步骤繁琐，结果不准确，等诊断为骨质疏松时，病人已经发生了骨量和结构的改变，加之目前又缺乏真正有效的治疗药物，因而亟需发现更加灵敏、特异、易于检测、明确而有效的生物标志物，对骨质疏松作出准确、及时的诊断。

另一方面，近来，人们越来越认识到miRNA是在发育、病理与生理条件下发挥重要作用的调控因子，参与肿瘤的发生、病毒的感染、细胞的分化与功能的发挥等一系列的生命过程中。miRNA是单链的小RNA分子，大约21或22个核苷酸长。这些小RNA分子不编码蛋白，但是它们通过降低mRNA的水平或与mRNA 3’UTR相结合抑制翻译，从而降低体内的蛋白水平。令人意想不到的是非编码RNA分子占人类基因组总量的98％，非编码RNA与蛋白编码RNA的比例与发育的复杂性密切相关。因此，如果筛选出在骨质疏松发生过程中血液中异常表达的miRNA作为生物标志物，并研制相应的诊断试剂盒，对骨质疏松的诊断现状必将是一次有力的推动。

关于miR-214

miR-214最早发现在斑马鱼的慢肌发育过程中发挥着重要的作用。后来证实，miR-214可以与Ezh2的3’UTR相结合，降低细胞内Ezh2的水平，从而促进骨骼肌细胞的分化和胚胎干细胞中发育调控因子的转录。在未分化的骨胳肌细胞中，PcG蛋白抑制miR-214的转录，随着发育的进行，伴随着PcG的解离和MyoD以及myogenin的募集，从而激活miR-214的转录。

已有研究表明，骨质疏松病人骨组织中的miR-214的表达水平明显升高，因此，骨组织中的miR-214可作为骨质疏松早期诊断及预防的生物标志物(中国专利申请公开号CN102335189A)。

但是，骨组织中的miR-214来源于成骨细胞，而成骨细胞成分不能进入到血液中，因此，骨组织中的miR-214与血液中的miR-214并无关联。

发明内容

本发明人长期从事miRNA相关的研究工作，在深入的研究中，我们通过大量的实验发现：

血液中的miR-214(5’-ACAGCAGGCACAGACAGGCAGU-3’)是骨质疏松发病的特异性生物标志物，从而完成了本发明。

即，本发明包括：

1.一种血液检测试剂盒，其包括：

用于扩增miR-214的引物，以及

用于从血液中提取miRNA的试剂；