[发明专利]检测肿瘤相关FAT4基因多态突变位点的引物和方法

说明书

技术领域

本发明属生命科学和生物技术领域，特别涉及检测FAT4基因多态突变热点的引物，采用普通PCR技术和Sanger测序，可用于快速检测癌症患者体内FAT4基因多态位点的突变情况。

背景技术

FAT4是位于4q28位点的FAT4基因家族成员之一。编码Cadherin黏附分子蛋白超家族新成员。1991年Mahoney等对果蝇研究发现，FAT4基因突变可导致幼虫的成虫盘呈肿瘤样生长。首次提出FAT基因家族具有肿瘤抑制因子的作用。

FAT肿瘤抑制基因同源体4(FAT4)是Hippo信号通路的一个关键调控因子。Hippo信号通路是新发现的生长控制信号通路，能够限制细胞的生长增殖，诱导细胞凋亡，而且可能与肿瘤发生有关。研究发现Hippo信号通路在多种肿瘤中均有异常调控，并且在胃癌中也有研究证实。FAT4基因在Hippo信号通路上游作为一种跨膜蛋白受体发挥生物学功能。FAT4基因在多种组织中均有表达，并且可能在胃肠道发育过程中发挥重要作用。有外显子测序研究发现胃癌组织中存在大量FAT4基因的非同义突变。胃癌是目前世界上死亡率位列第二的恶性肿瘤，在我国仍居消化恶性肿瘤的首位。胃癌的发病过程也是一个多因素、多步骤、多基因参与的复杂病理过程。抑癌基因的失活在胃癌的启动、进展和演进中均发挥了重要作用。因此有必要进一步开展胃癌相关抑癌基因的筛选与鉴定工作，并深入探讨候选抑癌基因的生物学功能。

生物体内发生的非同义突变大多数属于有害突变，只有少数是中性突变或有利突变，单核苷酸多态性位点rs1039808位于FAT4基因的第1外显子，并且能引起该基因第807密码子丙氨酸到缬氨酸的改变。单核苷酸多态性位点rs1567047位于FAT4基因的第9外显子，并且能引起该基因第3524密码子甘氨酸到天冬氨酸的改变。目前该位点的变异影响胃癌发生的确切机制还没有研究报道。但是，一种可能的解释是该位点所引起的氨基酸改变可能会影响其配体受体的特异性和亲和力，从而引起PCP信号通路和Hippo信号通路的异常调控，最终影响到胃癌的发生。此外，FAT4基因还与肠道癌和乳腺癌等疾病相关。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测FAT4基因多态突变热点的引物，采用PCR技术，可用于快速检测癌症患者体内FAT4基因多态位点的突变情况。所述检测FAT4基因多态热点突变情况的引物，包括：

扩增FAT4基因rs1039808位点的引物，其碱基序列为：

FAT4-1-F：5’-GGCAATTTACAATCTCCCAA-3’

FAT4-1-R：5’-GTAAGCTGCCCAGTGACCTG-3’

扩增FAT4基因rs1567047位点的引物，其碱基序列为：

FAT4-2-F：5’-CCTCTTTATTAGTCACCCTGGAA-3’

FAT4-2-R：5’-TCAGACTGAAATAACTGGTGGC-3’

进一步地，所述引物还包括测序引物，其碱基序列为：

检测FAT4基因rs1039808位点的测序引物碱基序列为：

FAT4-1-F：5’-GGCAATTTACAATCTCCCAA-3’

FAT4-1-R：5’-GTAAGCTGCCCAGTGACCTG-3’

检测FAT4基因rs1567047位点的测序引物碱基序列为：

FAT4-2-F：5’-CCTCTTTATTAGTCACCCTGGAA-3’

FAT4-2-R：5’-TCAGACTGAAATAACTGGTGGC-3’

进一步地，所述引物序列FAT4-1-F和FAT4-1-R是扩增FAT4基因第807位氨基酸序列的引物；引物序列FAT4-2-F和FAT4-2-R是扩增FAT4基因第3524位氨基酸序列的引物。

进一步地，所述引物序列FAT4-1-F和FAT4-1-R是测序FAT4基因扩增产物第807位氨基酸序列的引物；引物序列FAT4-2-F和FAT4-2-R是测序FAT4基因扩增产物第3524位氨基酸序列的引物。

本发明还提供检测FAT4基因多态热点突变情况的方法，包括以下步骤：

抽提血液或石蜡切片中的组织DNA；

用PCR扩增步骤1中提取的DNA；

对步骤2中的扩增产物进行测序；

对测序结果进行判断，确定FAT4基因是否发生突变；

其中PCR扩增引物为：

扩增FAT4基因rs1039808位点的引物，其碱基序列为：