[发明专利]一种人肺炎支原体培养基及其诊断试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种支原体培养基及其诊断试剂盒，尤其是涉及一种人肺炎支原体培养基及其诊断试剂盒。

背景技术

被发现近百年的支原体是一类无细胞壁的原核细胞型微生物，介于病毒与细菌之间。目前已分离到150多种。与人类疾病有关的主要是肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,Mp)、解脲脲原体(Ureaplasma urealyticum,简称Uu)及人型支原体(Mycoplasma hominis,简称Mh)等。Mp早就证明是非典型性肺炎的重要病原菌，诊断难度大，易引起并发感染，死亡率较高。2003年非典流行后，社区性呼吸道感染流行时，更加引起医疗界的关注。

Mp可进入血液，并可在呼吸系统以外的部位增殖，引起肺外并发症。并发症多出现于呼吸道症状后3～30d，常累及心血管系统、血液系统、中枢神经系统、皮肤及肝肾器官。随着对病原的不断认识和临床资料的不断积累，肺外感染的表现也越来越引起临床医生的关注和重视。

Mp的基因组小，仅是大肠杆菌的1/5～1/4，细胞小(小于100nm)且多形，有液体运动性；菌体集落小于1-2mm，肉眼难见，通常借助40-100倍显微镜检查计数。Mp生长繁殖的生理生化条件相对简单而自然地依附宿主组织细胞并有胞内生存的特点，难于人工培养且生长缓慢；与其他支原体的种间差异大，各有特点可用于分离、鉴别。此等造成临床诊断、治疗的困难，同时是研发技术的诀窍伏点。

国外Mp的培养分离有商品化的Difco、Oxoid等公司干燥基础基，法国生物梅里埃的成品培养基。液体培养常用试管、青霉素安培瓶，固体培养惯用圆形培养皿等，还有双相培养的，但是，均对习湿需CO₂的支原体的培养都不如人意。

商品液体培养基培养于37℃-38℃，4-7天，有的要10天后观察出报告。都以变色判断结果，有的阳性率低，有的出现假阳性。

我国对支原体基础及医院实验诊断的研究起步晚，多模仿国外方法，存在着临床培养阳性率低、易污染杂菌、出现假阳性等诸多问题，不能满足临床诊断治疗的需求；而且国内各实验室用于支原体的分离培养基，多数进口，价格昂贵；有的自制，质量不稳定，卫生管理部门已立法管理，促进研发创新产品。

Mp常用培养基为PPLO培养基，很多公司都有出售，但血清(常用马血清或猪血清)和抗生素自己添加，在液体培养基中通常要加入酚红做指示剂，当培养基由红色变为黄色时，即可判定Mp的生长。实际上，支原体的分离生长难，盲传几次，液体培养基变黄后，在固体培养基上出现典型菌落，才获得纯分离的菌株。

微生物学发展中，Mp曾称为“难养菌”，不但对营养要求严格，而且对培养环境中的湿度、温度、氧分压及基质pH等条件也很特殊。Mp生长繁殖的最适pH是7.4-7.6，60％～80％湿度环境。

传统的难养菌的分离培养及鉴定的方法，复杂、繁琐、易于污染、成本昂贵。本发明是从大量实践中总结经验而设计的，试制品能够满足临床诊断的特异性、可靠性要求，同时达到快速、安全、环保、资源节约。

发明内容

本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种人肺炎支原体培养基及其诊断试剂盒。

本发明创新设计新的Mp培养基配方，适用于Mp感染引起非典型性肺炎病原体的分离培养及鉴别，而获取病原菌的临床诊断信息。

本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：

一种人肺炎支原体培养基，包括TSB培养基与添加剂，所述的添加剂包括牛血清、DMEM、禽蛋黄提取物、丙酮酸钠以及谷氨酰胺，所述的DMEM含量为人肺炎支原体培养基总含量的5-15％(体积分数)，以人肺炎支原体培养基总体积计，所述的牛血清的含量为100ml/L，所述的禽蛋黄提取物含量为10-100ml/L，所述的丙酮酸钠含量为0.2-1.0g/L，所述的谷氨酰胺含量为0.3-1.0g/L。

作为优选，每1000ml人肺炎支原体培养基还含有以下抑菌剂：氨苄青霉素1百万单位，纳他霉素50mg。

每1000mlTSB培养基含有以下成分：

所述的禽蛋黄提取物中含有维生素A及有机硒，所述的维生素A含量为2～10u/ml，所述的有机硒含量为0.2～2.0ppm。

作为优选，所述的禽蛋黄提取物还含有微量的不饱和脂肪酸类与磷脂类物质，以及10-25v/v％的乙醇。

所述的禽蛋黄提取物制备方法如下：