[发明专利]蛋白配体和基因同时检测试剂盒及应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种核酸和蛋白同时检测方法和检测试剂盒的应用方法，尤其是涉及一种通过核酸信标配基将蛋白信号转换成核酸信号完成蛋白和基因检测统一，再利用实时定量-PCR进行同时检测的方法，属于蛋白核酸检测领域，具体的说是蛋白配体和基因同时检测试剂盒及应用。

背景技术

早期蛋白质检测是以抗体同特定待检物蛋白质的低解离常数和一定的特异性为基础实现的检测技术，该检测技术中抗体捕捉方法是简易、方便的筛选方法。以抗体捕捉法为例，是用抗原包被于固相支持物，然后用抗体去结合抗原，洗板去掉未结合的抗体，最后用和结合抗体特异识别的标记分子去检测结合抗体，许多抗体捕捉法是利用间接法来检测抗体。例如，检测抗体是鼠抗体，检测分子可能是带检测标记的兔抗鼠抗体。传统的检测标记包括放射性同位素，染料和作用于底物产生可检测分子如色原的酶。

随着基因技术应用的快速发展，在抗原抗体检测方面已有较多的基因检测技术。抗原捕捉检测法是检测样品中有无抗原。首先抗体先结合到支持物上，然后抗原加入和抗体反应形成复合物，最后检测复合物，也可以抗原抗体先反应形成复合物后，再结合到固相支持物上，然后检测复合物。检测方法中ELISA是广为人知的免疫检测法，还有抗体检测法等。

实时定量PCR是更先进的PCR技术，已用于核酸分析。在实时PCR中，PCR扩增DNA是在非线性标记双荧光杂交探针存在条件下进行，其中一种荧光染料用作报告分子，它的发射光谱被第二种荧光染料淬灭。实时PCR在链延伸时，利用Taq多聚酶5’核酸活性切割杂交探针，结果使报告荧光染料从淬灭染料中释放出来，致报告分子发射峰值增加。整个反应实时监控。逆转录 –PCR也可应用。系列检测系统用96孔热循环仪可连续检测每孔中PCR反应时的荧光谱，因此，可排除复制子试验室污染。

核酸与蛋白质在细胞内相互作用是普遍现象。核酸能折叠形成二级结构和三级结构，这对其与蛋白质相互结合作用非常重要。通过使核苷酸序列多样化而使体外检测核酸蛋白质相互作用方法成熟。SELEX技术被用来分离所选靶目标的核苷酸配体，这些配体被称为配基或适配体，意即核酸可以形成一定结构并适配入靶分子的口袋，SELEX技术就是利用该原理筛选靶分子配基的方法。

尽管上述进步显著，但诊断方法仍需提高灵敏度，减少人工操作，改进动态监测以快速分析样品中靶标的存在与否及对其定量。

发明内容

本发明提出一种通过实时定量-PCR扩增核酸信标和基因核酸分子，实施对配体和基因同时检测的技术方法，对细胞、微生物、基因和蛋白质等组学的研究具有重要意义。

为实现上述目的，本发明所述的蛋白配体和基因同时检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中主要包括：所述试剂盒中主要包括：待测样品、捕捉琼脂磁珠试剂、洗涤液、检测试剂、核酸提取试剂、检测体系；

所述待测样品含有被检测蛋白配体和基因；

所述捕捉琼脂磁珠试剂是琼脂磁珠-捕捉靶分子抗体复合物；

所述洗涤液是0.01M PBS+0.05M MgCl₂+0.01Tween-20；

所述检测试剂是0.01M核酸信标配基检测分子+0.01M PBS+0.05M MgCl₂的混合溶液；

所述核酸提取试剂是体积比为含饱和酚：氯仿：异戊醇（25：24：1）；

所述检测体系为含有靶分子核酸信标配基和基因的Taqman探针和引物的常规检测试剂。

本发明所述的蛋白配体和基因同时检测试剂盒的应用，其特征在于：包括下述步骤：

(1)将捕捉琼脂磁珠试剂加入到待测样品；在37℃，45min孵育，使琼脂磁珠-捕捉靶分子抗体复合物与待测样品中的靶分子结合，然后利用磁性分离分离出磁珠与清液并分别吸出，然后用洗涤液洗涤磁珠3次，3min/次，形成待测复合物待用；

(2)再在上述步骤(1)中形成的待测复合物中加入检测试剂，该检测试剂中的核酸信标配基与靶分子结合形成捕捉琼脂磁珠-靶分子-核酸信标配基结构，将未结合形成捕捉琼脂磁珠-靶分子-核酸信标配基结构的分子洗掉，用洗涤液洗涤3次，3min/次，得到磁珠液待用；

(3)将完成上述步骤的磁珠液中加入步骤(1)分离吸出的清液，再利用核酸提取试剂提取核酸；

(4)将步骤（3）提取出的核酸进行扩增基因常规检测；

(5)进行常规检测。

所述待测样品为血清、尿液、细胞液、菌液或内分泌液需靶分子和基因同时检测的生物样本中的一种。