[发明专利]用于提供含佐剂病毒体的方法及由此可获得的含佐剂病毒体

权利要求书

1.一种用于制备含佐剂病毒体的方法，包括以下步骤：

(i)提供包含膜融合蛋白的非含佐剂病毒体的水性组合物；

(ii)将两亲性佐剂溶解于可以与水形成均匀混合物的药用非水溶剂；以及

(iii)在所述水性组合物中稀释所述两亲性佐剂的溶液以诱导在病毒体膜的外小叶中插入佐剂，同时保持病毒体的膜融合活性。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述非水溶剂在20℃下具有至少5g/100mL的在水中的溶解度。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述非水溶剂是水可混溶的溶剂。

4.根据权利要求1或2所述的方法,其中，所述非水溶剂选自由乙腈、2-丁醇、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸、甲酸、甲醇、乙醇、DMSO、DMF、正丙醇、异丙醇、2-甲基-1-丙醇和THF、或它们的任何混合物组成的组。

5.根据权利要求4所述的方法，其中，所述非水溶剂是DMSO或DMF。

6.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述膜融合蛋白是病毒融合蛋白。

7.根据权利要求6所述的方法，其中，所述膜融合蛋白是RSV F蛋白。

8.根据权利要求1或2所述的方法，包括通过包膜病毒的功能重组来制备病毒体。

9.根据权利要求8所述的方法，其中，所述功能重组包括使包膜病毒接触含有短链磷脂或去污剂的溶液，使得所述病毒的病毒包膜溶解，进一步包括从所述溶液去除短链磷脂或去污剂，使得形成功能重组的病毒包膜。

10.根据权利要求9所述的方法，其中，所述短链磷脂具有大于0.1mM的临界微团浓度。

11.根据权利要求10所述的方法，其中，所述短链磷脂是磷脂酰胆碱。

12.根据权利要求9所述的方法，其中，所述去污剂是八乙二醇单正十二烷基醚。

13.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述两亲性佐剂是由Toll样受体识别的化合物。

14.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述两亲性佐剂是糖脂。

15.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述两亲性佐剂是两亲性肽。

16.根据权利要求1所述的方法，其中，所述病毒体包含至少一种另外的抗原。

17.根据权利要求16所述的方法，其中，所述抗原是病毒抗原。

18.根据权利要求16或17所述的方法，其中，所述抗原是膜内在蛋白或附接至膜锚定部分的抗原。

19.根据权利要求18所述的方法，其中，所述膜锚定部分是跨膜域或膜锚定氨基酸序列。

20.根据权利要求18所述的方法，其中，所述膜锚定部分是脂质部分。

21.根据权利要求6所述的方法，其中，所述膜融合蛋白选自由HIVgp120/gp41蛋白、副粘病毒F蛋白和流感病毒血凝素蛋白、杆状病毒的gp64蛋白、塞姆利基森林病毒的E蛋白组成的组。