[发明专利]用于基因治疗神经疾病的AAV-5假型载体

说明书

发明领域

本发明涉及病毒学及基因治疗领域。本发明特别涉及一种治疗或预防哺乳动物、优选人的神经疾病的方法。

发明背景

中枢神经系统(CNS)是脊椎动物的复杂系统，包括脑和脊髓。周围神经系统是脑和脊髓之外的神经系统部分。脊髓将来自周围神经系统的感觉信息传导到脑，并且将来自脑的运动信息传导至各个效应器。

已经研究了使用病毒载体的基因治疗方法，用于递送治疗剂以治疗CNS相关的各种疾病。腺相关病毒(AAV)载体具有许多优势，包括低毒性和免疫原性及转基因在CNS中长期表达(Kaplittetal(1994)NatGenet8:148-154；Bartlettetal.(1998)HumGeneTher9:1181-1186；Passinietal.(2002)JNeurosci22:6437-6446)。因此，进一步研究AAV以进行CNS基因治疗。

许多CNS疾病，例如肌萎缩性侧索硬化(ALS，也称作运动神经元病(MND))，影响在CNS中广泛分布的皮质和脊髓运动神经元。经常见到注射进CNS中的病毒载体转导注射部位附近的细胞，但是不转导所需的广泛区域的细胞。此外，注射进脑中是受制于安全考虑的外科手术侵入性方法。已进行了一些研究以评定使用腰椎穿刺(punction)的基因治疗方法。本领域中报道的缺点是通过腰椎穿刺转移的基因不能转导神经元组织，只转导脑膜成纤维细胞，除非是在脑实质内(intraparenchymally)注射(Finegold(1999)HumGeneTher10:1251-1257；Milligan(2005)EurJNeurosci21:2136-2148；Milligan(2005)MolPain1:9；Milligan(2006)Pain126:294-308)，导致转基因表达低于2周(Milligan(2005)EurJNeurosci21:2136-2148；Milligan(2005)MolPain1:9；Lin(2002)NeurosciLett317:1-4；Lin(2002)GeneTher9:1247-1253)，需要多次注射(Milligan(2006)Pain126:294-308)或者需要预处理(Vulchanova(2010)MolecularPain6:31)。

Storek及同事(Storek(2008)PNAS105(3):1055-1060)揭示了他们使用常规的单链rAAV2不能检测到转基因表达，因此他们检测了各种rAAV载体的修饰：用不同血清型的衣壳和双链自身互补的rAAV进行假型(pseudotype)。特别地，Storek等揭示了在鞘内施用时自身互补的AAV8在背根神经节有效并选择性转导初级感觉神经元，但是在脑中则不转导，且在单载体施用后即建立长期基因表达。

因此，本领域仍需要可用于治疗或预防哺乳动物神经疾病的基因转移方法。特别需要没有上述一或多个缺点的转导神经元组织的基因转移方法。

发明概述

第一方面，本发明涉及在哺乳动物对象、优选人中用作药物的腺相关病毒(AAV)基因治疗载体，其中所述基因治疗载体包含AAV血清型5衣壳蛋白及侧翼是AAVITR的感兴趣的基因产物，并且其中所述基因治疗载体通过腰椎鞘内施用而施用。

在一个优选的实施方案中，所述腰椎鞘内施用位于选自L4-L5，L3-L4，L1-L2和L2-L3的部位。

在一个优选的实施方案中，所述AAV基因治疗载体是单链AAV基因治疗载体或者单体双链(monomericduplex)载体。