[发明专利]细菌人工染色体

权利要求书

1.细菌人工染色体(BAC)用于制备疫苗的应用，其中所述BAC包含：

-诱导型细菌ori序列，其用于扩增所述BAC至每细菌细胞多于10个拷贝，和

-病毒表达盒，其包含减毒RNA病毒基因组的cDNA，并包含用于在哺乳动物细胞中转录所述病毒cDNA和用于将转录的RNA加工成感染性RNA病毒的顺式-调节元件。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述减毒RNA病毒基因组的cDNA是RNA病毒基因组的嵌合病毒cDNA构建体，其中异源性DNA序列已被插入或其中天然病毒序列已缺失、被截短或突变。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述病毒表达盒包含

正链RNA病毒基因组的cDNA，

RNA聚合酶驱动的启动子，其位于所述cDNA的5’端之前，用于起始所述cDNA的转录，和

供于RNA自切割的元件，其位于所述cDNA的3’端之后，用于在设定位置切割所述病毒cDNA的RNA转录本。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述正链RNA病毒选自下组：黄病毒、丙型肝炎病毒、疫病毒、囊膜病毒、小核糖核酸病毒、冠状病毒、戊型肝炎病毒和萼状病毒。

5.如权利要求1-4中任一项所述的应用，其特征在于，所述病毒表达盒包含黄热病病毒的cDNA。

6.如权利要求1-4中任一项所述的应用，其特征在于，所述病毒表达盒包含减毒活YFV-17D黄热病病毒疫苗的cDNA。

7.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述病毒表达盒包含属于下组的病毒的cDNA：负链RNA病毒、双链RNA病毒或双义RNA病毒。

8.如权利要求1-7中任一项所述的应用，其特征在于，所述细菌人工染色体还包含用于穿梭至酵母和使所述细菌人工染色体在酵母中保持的酵母自主复制序列。

9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述酵母ori序列是2μ质粒起始或ARS1(自主复制序列1)或其功能同源衍生物。

10.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述RNA聚合酶驱动的启动子是RNA聚合酶II启动子。

11.如权利要求10所述的应用，其特征在于，所述RNA聚合酶II启动子是巨细胞病毒即刻早期(CMV-IE)启动子、猴病毒40启动子或其功能同源衍生物。

12.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述RNA聚合酶驱动的启动子是RNA聚合酶I或III启动子。

13.如权利要求3-11中任一项所述的应用，其特征在于，所述用于RNA自切割的元件是丁型肝炎病毒的基因组核酶的cDNA或功能同源RNA元件。

14.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述病毒表达盒包含减毒活YFV-17D疫苗的cDNA，其中编码病毒颗粒表面蛋白的一种或多种cDNA序列缺失、被截短或突变，从而YFV-17D的该功能性病毒颗粒表面蛋白不表达，并且编码异源性蛋白质的cDNA序列插入所述YFV-17DcDNA。

15.如权利要求14所述的应用，其特征在于，所述异源性蛋白质是黄病毒的病毒颗粒表面蛋白。

16.如权利要求14或15所述的应用，其特征在于，所述病毒表达盒包含减毒活YFV-17D疫苗的cDNA，其中，插入一种或多种无关的cDNA序列，其表达为所述病毒多聚蛋白中的一种或多种异源性蛋白质。

17.如权利要求1-16中任一项所述的应用，其特征在于，所述病毒表达盒包含病毒cDNA，其中插入将由所述重组病毒异源表达的外源cDNA序列。