[发明专利]具有经修饰的糖基化的蛋白及其生产方法

说明书

相关申请

本申请根据美国法典35§119(e)要求2013年2月13日提交的标题为“具有经修饰的糖基化的蛋白及其生产方法”的美国临时申请系列号61/764,502的权益，其全部公开通过提述完整并入本文。

技术领域

本公开涉及蛋白和蛋白生产方法的领域。

技术背景

蛋白在乳腺中的转基因产生允许大量蛋白的产生，包括治疗性蛋白。然而，在乳腺中产生的蛋白的糖基化模式有时候与血清产生的蛋白的糖基化模式不同。因此，需要修饰乳腺产生的蛋白的糖基化的方法。

发明简述

在一个方面，本公开提供具有经修饰的糖基化的蛋白及其生产方法。一方面，本公开提供用于生产具有经修饰的糖基化的蛋白的转基因动物和细胞。在一些实施方案中，所述经修饰的糖基化是增加的唾液酸化。

在一个方面，本公开提供生产具有经修饰的糖基化的蛋白的方法，所述方法包含提供转基因的哺乳动物，其已经经过修饰以在乳腺中具有增加的唾液酸转移酶表达，其中所述转基因哺乳动物在乳腺中表达蛋白，并且从所述转基因哺乳动物的乳腺中收获所述蛋白。

在一个方面，本公开提供生产具有经修饰的糖基化的蛋白的方法，所述方法包括提供乳腺上皮细胞，其已经经过修饰以具有增加的唾液酸转移酶表达，其中所述乳腺上皮细胞表达蛋白，并且从所述乳腺上皮细胞中收获所述蛋白。

在本文提供的方法的一些实施方案中，与在尚未修饰为具有增加的唾液酸转移酶表达的转基因哺乳动物或乳腺上皮细胞中产生的蛋白相比，糖基化是经修饰的。在本文提供的方法的一些实施方案中，所述经修饰的糖基化是增加的唾液酸化。

在一个方面，本公开提供生产具有增加的唾液酸化的蛋白的方法，所述方法包含提供转基因的哺乳动物，其已经经过修饰以在乳腺中具有增加的唾液酸转移酶表达，其中所述转基因哺乳动物在乳腺中表达蛋白，并且从所述转基因哺乳动物的乳腺中收获具有增加的唾液酸化的蛋白。

在本文提供的方法的一些实施方案中，与在尚未修饰为具有增加的唾液酸转移酶表达的转基因哺乳动物或乳腺上皮细胞中产生的蛋白相比，唾液酸化是增加的。

在本文提供的方法的一些实施方案中，所述具有经修饰的糖基化的蛋白或具有增加的唾液酸化的蛋白是人蛋白。在本文提供的方法的一些实施方案中，所述具有经修饰的糖基化的蛋白或具有增加的唾液酸化的蛋白是抗体。在本文提供的方法的一些实施方案中，所述具有经修饰的糖基化的蛋白或具有增加的唾液酸化的蛋白是抗凝血酶。在本文提供的方法的一些实施方案中，所述具有经修饰的糖基化的蛋白或具有增加的唾液酸化的蛋白是α-1抗胰蛋白酶。

在一个方面，本公开提供了根据本文中提供的任何方法生产的具有经修饰的糖基化的蛋白或具有增加的唾液酸化的蛋白。

在一个方面，本公开提供组合物，其包含根据本文提供的任意方法生产的具有经修饰的糖基化的蛋白或具有增加的唾液酸化的蛋白，所述组合物进一步包含乳。

在一个方面，本公开提供在乳腺中增加唾液酸转移酶活性的方法，所述方法包含提供转基因哺乳动物，其已经经过修饰以在乳腺中具有增加的唾液酸转移酶表达。

在一个方面，本公开提供生产唾液酸转移酶的方法，所述方法包含提供转基因哺乳动物，其已经经过修饰以在乳腺中具有增加的唾液酸转移酶表达，以及从所述转基因哺乳动物的乳腺中收获唾液酸转移酶。在本文提供的方法的一些实施方案中，所述方法进一步包括使用唾液酸转移酶来使蛋白唾液酸化。

在一个方面，本公开提供在乳腺中增加唾液酸转移酶活性的方法，所述方法包含生成转基因的哺乳动物，其已经经过修饰以在乳腺中具有增加的唾液酸转移酶表达。在一个方面，本公开提供生产唾液酸转移酶的方法，所述方法包含生成转基因的哺乳动物，其已经经过修饰以在乳腺中具有增加的唾液酸转移酶表达，并从所述转基因哺乳动物的乳腺中收获唾液酸转移酶。在本文提供的方法的一些实施方案中，所述方法进一步包含使用唾液酸转移酶来使蛋白唾液酸化。在一些实施方案中，将唾液酸转移酶置于与所述蛋白接触。

在一个方面，本公开提供根据本文提供的任意方法生产的唾液酸转移酶。

在一个方面，本公开提供组合物，其包含根据本文提供的任意方法生产的唾液酸转移酶，并进一步包含乳。

在本文提供的方法、蛋白、组合物、转基因哺乳动物或乳腺上皮细胞的一些实施方案中，转基因哺乳动物或乳腺上皮细胞已经通过将编码唾液酸转移酶的核酸序列引入所述转基因哺乳动物或乳腺上皮细胞的基因组中来修饰。