[发明专利]DNA构建体和制备具有条件突变型Acvr1等位基因的小鼠的方法

权利要求书

1.一种DNA构建体，其中所述构建体包含处于有义方向的野生型的具有功能的Acvr1外显子5，其中所述野生型的具有功能的Acvr1外显子5的上游和下游侧翼连接有第一重组酶识别位点，以及包含含有编码R206H的突变的突变型Acvr1外显子5，其中所述突变型Acvr1外显子5处于反义方向并且所述突变型Acvr1外显子5的上游和下游侧翼连接第二重组酶识别位点，其中所述第一重组酶识别位点和所述第二重组酶识别位点被定向从而使得在所述DNA构建体与小鼠的基因组重组生成经修饰的Acvr1等位基因后，重组酶可作用于所述第二重组酶识别位点以指导所述突变型外显子5至有义方向的倒转，并在此后指导所述经修饰的Acvr1等位基因中所述野生型的具有功能的Acvr1外显子5的缺失，剩下经转化的经修饰的Acvr1等位基因，所述经转化的经修饰的Acvr1等位基因包含倒转至有义方向的所述突变型Acvr1外显子5，所述突变型Acvr1外显子5侧翼连接有不相容的第一重组酶识别位点和第二重组酶识别位点，其中所述经转化的经修饰的Acvr1等位基因能够被表达以赋予异位骨化表型。

2.根据权利要求1所述的DNA构建体，其中所述第一重组酶识别位点和所述第二重组酶识别位点为Lox2372和LoxP或LoxP和Lox2372。

3.根据权利要求1所述的DNA构建体，其中所述重组酶是CreER^T2。

4.根据权利要求1所述的DNA构建体，其中所述野生型Acvr1外显子5是人外显子5，但所述人外显子5的第一密码子为谷氨酸而非天冬氨酸。

5.一种制备小鼠的方法，所述小鼠具有赋予异位骨化表型的经修饰的Acvr1等位基因，所述方法包括：

将根据前述权利要求中任一项所述的DNA构建体引入小鼠基因组以生成具有经修饰的Acvr1等位基因的小鼠；并且

诱导所述重组酶的表达以赋予所述异位骨化表型。