[发明专利]双相发酵制备鼠李糖脂条件优化的方法

权利要求书

1.双相发酵制备鼠李糖脂条件优化的方法，其特征在于该方法步骤如下：

1)初步驯化：将铜绿假单胞菌CICC10204活化培养，将活化培养过的所述铜绿假单胞菌转接至驯化培养基中培养；

2)二次驯化：将培养后所述铜绿假单胞菌的菌液以3％-5％的接种量接种至已灭菌的驯化培养基中培养；

3)三次驯化：将经二次驯化培养产出的菌液以3％-5％的接种量接种至新配制并灭菌的驯化培养基中驯化培养；

4)将步骤3)中驯化得到的菌液稀释分离，挑出若干支单菌落，将菌落接种于发酵培养基中发酵，获得铜绿假单胞菌发酵液；

5)碳源优化测定：在一定条件下，分别选用淀粉、葡萄糖、乳糖为碳源，将所述铜绿假单胞菌发酵液培养，测定得出不同碳源对应的铜绿假单胞菌发酵液的表面张力值；

6)温度优化测定：在步骤5)中确定的优化条件下，在30-40℃的温度范围中选取不同的培养温度，将所述铜绿假单胞菌发酵液培养一定时间，测定得出不同温度下对应的铜绿假单胞菌发酵液的表面张力值；

7)pH优化测定：在步骤6)中确定的优化条件下，将发酵培养基的初始pH调整至5-9，将所述铜绿假单胞菌发酵液培养一定时间，测定得出不同pH值下对应的铜绿假单胞菌发酵液的表面张力值；

8)接种量优化：在步骤7)中确定的优化条件下，选取1％－8％的接种量进行接种发酵培养一定时间，测定得出不同接种量下对应的铜绿假单胞菌发酵液的表面张力值；

9)分析比较步骤5)、步骤6)、步骤7)，步骤8)中得到的不同条件下表面张力值结果，获得双相发酵制备鼠李糖脂的优化发酵条件。

2.根据权利要求1所述的双相发酵制备鼠李糖脂条件优化的方法，其特征在于：步骤1)与步骤2)中培养的条件为24-60h，培养温度32-37℃，转速150-200r/min。

3.根据权利要求1所述的双相发酵制备鼠李糖脂条件优化的方法，其特征在于：步骤3)中发酵培养时间为48h。

4.根据权利要求1所述的双相发酵制备鼠李糖脂条件优化的方法，其特征在于：步骤4)中发酵条件为转速为130r/min摇床培养20h。

5.根据权利要求1所述双相发酵制备鼠李糖脂条件优化的方法，其特征在于：步骤5)中发酵培养的条件为浓度为20-40g/L、培养温度30℃、摇床转速130r/min。

6.根据权利要求1所述的双相发酵制备鼠李糖脂条件优化的方法，其特征在于：步骤5)、步骤6)、步骤7)、步骤8)中培养时间均为20h。