[发明专利](‑)γ‑内酰胺的制备方法

权利要求书

1.(-)γ-内酰胺的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、共价结合法固定化γ-内酰胺酶；

S2、拆分γ-内酰胺酶制得(-)γ-内酰胺；

其中，所述S1包括，

S11、预处理步骤：

a、洗涤，用2-5倍质量体积比的0.2mol/L、pH＝7.0-9.0的磷酸缓冲液对伯氨基树脂用磷酸盐缓冲液洗涤2-3次，过滤得到洗涤平衡的伯氨基树脂，所述伯氨基树脂的平衡pH值为6.5-8.5；

b、预活化，在洗涤后的伯氨基树脂中加入戊二醛溶液进行树脂的预活化，使混合物的终浓度为1％-6％，在室温下连续搅拌4-8h，过滤得到固定前树脂；反应式如下：

S12、制备酶液：

c、菌体制备，将含有硫磺矿硫化叶菌(+)γ-内酰胺酶基因的大肠杆菌工程菌进行发酵，罐上发酵条件为：温度37℃，通气量1vvm，转速偶联溶氧，使溶氧范围为20-50％之间，诱导剂为乳糖，发酵时间16h，离心获得湿菌体；

d、将获得的湿菌体按照200g/L置于0.1mol/L、pH＝7.0的磷酸盐缓冲液中进行重悬，菌悬液使用高压匀质机匀质2-5次，压力不低于800bar；

e、匀质后的破碎液于80℃处理10-15min，以9000rpm离心5min，去除沉淀杂质，获得上清酶液；

S13、共价结合固定化酶：

f、混合，将经预处理后的树脂与获得的酶液按1:5-10的比例混合，在室温下搅拌固定12-24h；

g、过滤，过滤去除混合后的残留酶液，得到γ-内酰胺酶；

所述S2包括，

S21，在g得到的γ-内酰胺酶中加入γ-内酰胺和去离子水，在40℃进行搅拌反应，进行拆分转化得到(-)γ-内酰胺，所述γ-内酰胺酶与γ-内酰胺的质量比为1:1；所述S21中γ-内酰胺的浓度＞300g/L。

2.根据权利要求1所述的(-)γ-内酰胺的制备方法，其特征在于：所述γ-内酰胺酶的蛋白浓度＞0.5g/L。

3.根据权利要求1所述的(-)γ-内酰胺的制备方法，其特征在于：所述制备方法制得的(-)γ-内酰胺光学纯度为99.98％。