[发明专利]Notch配体Delta-like1融合蛋白的纯化与复性的方法

权利要求书

1.一种Notch配体Delta-like1融合蛋白的纯化与复性的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)将含有HD1R的包涵体用洗涤缓冲液多次洗涤、离心，溶解于强变性剂缓冲液中，得到粗分离的HD1R蛋白；

2)将含有人胰岛素原变性抽提液直接进样到流动相A平衡的色谱柱，再用PBS、1mol/LNaCl或Tris、1mol/LNaCl的流动相B线等度洗脱，收集目标峰色谱馏分，得到复性与纯化后的HD1R的色谱馏分；

3)将收集的目标峰色谱馏分直接进样，用20mmol/LPBS的流动相平衡的色谱柱进一步脱盐，持续洗脱30min，洗脱流速为0.5-1.5ml/min，得到复性与纯化更高纯度和活性的色谱馏分。

2.根据权利要求1所述的一种Notch配体Delta-like1融合蛋白的纯化与复性的方法，其特征在于，所述的色谱柱采用高效离子交换色谱柱可选HiTrap CaptoQ或HiTrap Capto DEAE，均为GE Healthcare公司生产的，规格为0.7×2.5cm，1mL，也可将DEAE填料自行填装至GE Healthcare公司生产的Column XK16内。

3.根据权利要求1所述的一种Notch配体Delta-like1融合蛋白的纯化与复性的方法，其特征在于，所述的流动相A中PBS浓度为20-40mmol/L；所述的流动相A中Tris的浓度为20-40mmol/L。

4.根据权利要求1所述的一种Notch配体Delta-like1融合蛋白的纯化与复性的方法，其特征在于，所述的流动相A中PBS的pH为7.5-8.0；所述的流动相A中Tris的pH为7.5-8.0。

5.根据权利要求1所述的一种Notch配体Delta-like1融合蛋白的纯化与复性的方法，其特征在于，所述的流动相B中PBS浓度为20-40mmol/L；所述的流动相B中Tris的浓度为20-40mmol/L。

6.根据权利要求1所述的一种Notch配体Delta-like1融合蛋白的纯化与复性的方法，其特征在于，所述的流动相B中PBS的pH为7.5-8.0；所述的流动相B中Tris的pH为7.5-8.0。

7.根据权利要求6所述的一种Notch配体Delta-like1融合蛋白的纯化与复性的方法，其特征在于，所述的流动相B中PBS的pH为6.0-7.0。

8.根据权利要求1所述的一种Notch配体Delta-like1融合蛋白的纯化与复性的方法，其特征在于，所述的洗脱流速为0.5-1.5mL/min。

9.根据权利要求1所述的一种Notch配体Delta-like1融合蛋白的纯化与复性的方法，其特征在于，所述持续洗脱的方式为流动相A平衡后，流动相B等度洗脱5-10min，延长10min。

10.根据权利要求1所述的一种Notch配体Delta-like1融合蛋白的纯化与复性的方法，其特征在于，所述的进一步脱盐后的色谱柱为HiTrap Desalting column。