[发明专利]三肽囊素规模化制备方法及在防控畜禽重大疾病上的应用

说明书

技术领域

本发明涉及兽医学和兽药学、免疫学领域。具体地，本发明涉及三肽囊素规模化制备及作为疫苗佐剂在防控畜禽重大疾病上的应用。

背景技术

囊素三肽(也称为“三肽囊素”)是Audhya在1986年首次从法氏囊中分离到的一种称为Bursin的三肽，氨基酸顺序为Lys-His-Gly-NH₂，功能是诱导禽类和哺乳类的B细胞前体分化为B细胞，选择性分化激素，对体液免疫起着重要的调节作用(T.Audhyeetal,Science,231,997,1986)。

针对当前规模化、集约化养殖业中普遍面临的畜禽群体免疫功能低下和疫苗免疫水平不高，甚至有的疫苗有免疫抑制作用的重要问题，同时针对市场上缺乏严格质量控制的畜禽用免疫增强剂，研制出既具有较强免疫调节功能，具明显佐剂活性的安全、高效、质量稳定、价格低廉的免疫佐剂是预防兽医学研究的重要方向和发展趋势之一。

近年来，禽流感已成为世界关注的严峻问题，如何提高禽流感疫苗的作用是开发高效低成本疫苗的关键，其中囊素肽作为免疫增强剂已受到充分的证实。传统上，利用提取的囊素肽虽然能够在加强疫苗效果中获得应用，但是质量控制存在非常严重的问题。

利用人工合成的囊素三肽，虽然可以解决质量控制的问题，但是由于是畜牧业用的疫苗，以目前的工艺还存在成本太高，无法推广使用的困难。所以研制低成本、适合产业化的增强型禽流感疫苗佐剂是本领域迫切需要的。

现有技术中虽然有公开了一些合成三肽囊素的方法，但是步骤烦琐，无法大幅度降低成本，或者合成的三肽囊素活性较低。

综上所述，为了推广活性肽疫苗佐剂的应用，迫切需要开发新的制法简便、成本低廉、适合规模化制备三肽囊素的方法。

发明内容

本发明的目的就是提供一种三肽囊素规模化制备及作为疫苗佐剂在防控畜禽重大疾病上的应用。

在本发明的第一方面，提供了三肽囊素、其衍生物或其药学上可接受的盐，在制备药物中的用途，所述药物用于：

(1)提高动物血清中IL-6的水平；和/或

(2)提高动物血清中IL-2的水平；

在另一优选例中，所述动物为猪。

在另一优选例中，所述药物还用于：

(3)提高猪蓝耳病疫苗的免疫效果；

(4)提高猪瘟疫苗的免疫效果；和/或

(5)提高动物血浆中γ球蛋白含量。

在另一优选例中，所述药物还用于提高鸡血浆中γ球蛋白含量。

本发明的第二方面，提供了一种三肽囊素衍生物的制备方法，包括步骤：

(a)在合适的惰性溶剂中，在胰蛋白酶存在下，在pH为6.2-7.2和33-38℃下，使BOC-Lys-OH和HCl₂-His-Gly-NH₂反应，形成式III化合物；

BOC-Lys-OH+HCl₂-His-Gly-NH₂→BOC-Lys-His-Gly-NH₂

式I

式中，BOC为叔丁氧羰基；

(b)用HCl/HOAC处理式III化合物，从而去除保护基，形成下式所示的三肽囊素衍生物：

2HCl-Lys-His-Gly-NH₂。

在另一优选例中，所述步骤(a)中的pH为6.8。

在另一优选例中，所述步骤(a)中的反应温度为37.5℃。

在另一优选例中，所述所述的HCl₂-His-Gly-NH₂是用活化酯缩合法，通过BOC₂-His-OSU和H-Gly-NH₂的反应而制备的。

本发明的第三方面，提供了一种药物组合物或疫苗组合物，它含有

(i)三肽囊素、其衍生物或其药学上可接受的盐；和

(ii)猪瘟疫苗和/或猪蓝耳病疫苗；

以及，药学上或免疫学上可接受的载体。

在另一优选例中，所述的组合物中，三肽囊素的含量是每1000毫升或1000g动物疫苗中含有150-2000微克三肽囊素。

在另一优选例中，当将所述组合物给予猪时，用量为5-20微克三肽囊素/千克体重，更佳地为5-15微克三肽囊素/千克体重。

附图说明

图1显示了BS对血浆γ球蛋白含量的影响。

图2显示了外周血T淋巴细胞的增殖转化。